基因工程制藥-文庫吧資料
2025-01-09 13:33本頁面
【正文】 出更多的內(nèi)源性生理活性物質(zhì)。 四、基因工程制藥的優(yōu)點 （ 1）利用基因工程技術(shù)可以生產(chǎn)出過去難以獲得的生理活性蛋白和多肽。 （ 3）激素 胰島素、生長激素、心鈉素、人腦激素。 基因克隆載體必須具備三個條件 松弛型的復(fù)制子、多克隆位點、 篩選標(biāo)記 . 常見 :質(zhì)粒、噬菌體 ◆ 克隆載體必需結(jié)構(gòu) : 具有 復(fù)制子 ， 篩選標(biāo)記 ，位于多克隆位點的上下游具有轉(zhuǎn)錄效率較高的 啟動子 ，起始密碼子和核糖體結(jié)合位點 ， 轉(zhuǎn)錄終止子 結(jié)構(gòu)． ◆ 表達載體結(jié)構(gòu)特點： 三、基因工程技術(shù)所生產(chǎn)的藥物 傳統(tǒng)方法很難生產(chǎn)的，主要是藥用活性蛋白質(zhì)和多肽類，包括： （ 1） 免疫蛋白質(zhì) 各種抗原、單克隆抗體、乙肝疫苗。 ④分子量小，拷貝數(shù)高。 ②能攜帶外源 DNA進入受體細胞，或游離在細胞質(zhì)中進行自我復(fù)制，或整合到染色體 DNA上隨染色體 DNA的復(fù)制而復(fù)制。 表達載體 (expression vector) 使插入的外源 DNA序列轉(zhuǎn)錄翻譯 ， 表達出多肽鏈 ， 這樣的載體稱為 表達載體 。 重要的工具酶 工具酶 活性 限制性核酸內(nèi)切酶 （ Ⅱ 型） 識別特異堿基序列，切割 DNA T4 DNA連接酶 催化 DNA5’ 磷酸與 3’ 羥基 形成磷酸二酯鍵 DNA聚合酶 以 DNA為模板合成 DNA 逆轉(zhuǎn)錄酶 以 RNA為模板合成 cDNA 堿性磷酸酶 切除 5’ 末端磷酸 末端轉(zhuǎn)移酶 催化 3’ 端合成同聚尾 基因工程的載體是為“攜帶”感興趣的外源 DNA、實現(xiàn)外源DNA的無性繁殖或表達有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些 DNA分子。 應(yīng)用 ① 探針標(biāo)記 G32G32G32G32 G32G32G32G32 ② 在載體和待克隆的片段上形成同聚物尾 ， 以便于進行連接 3180。端進行標(biāo)記 。 用途 ⒈ 制備載體 時，用堿性磷酸酶處理去除載體分子 5’－端磷酸基后，可 防止載體自身環(huán)化 連接，提高重組效率。 6. DNA連接酶 (DNA ligase) 催化雙鏈 DNA中一條鏈的 3’ OH與另一條鏈的 5’ PO3H2形成磷酸二酯鍵 ， 從而構(gòu)成完整的 DNA長鏈 。339。539。539。339。539。539。539。339。 5. DNA聚合酶 Ⅰ 大片段 ——Klenow片段 Klenow片段用途 ⑴ 補齊雙鏈 DNA的 3ˊ末端； ⑵ 用標(biāo)記堿基補 齊 3ˊ末端 ； 聚合酶K l e n o w D N A [ 32P ] d N T Pα雙鏈 DNA粘端5 39。 特點 逆轉(zhuǎn)錄酶是一個多功能性酶，至少具有以下 3種酶 活性： ⑴ 以單鏈 RNA為模板， 催化合成 cDNA單鏈 ⑵ 具有 RNase H 活性，能水解 RNA:DNA雜交鏈中的 RNA ⑶ 以 DNA為模板， 催化合成 cDNA雙鏈。 539。 339。 539。 339。 539。 339。 539。 539。 339。 包括： 5ˊ→3ˊDNA 聚合酶活性 5ˊ→3ˊ 核酸外切酶活性 3ˊ→5ˊ 核酸外切酶活性 DNA pol Ⅰ 應(yīng)用 ⑴ 常用來 催化 DNA缺口平移反應(yīng)，制備高比活性 DNA 探針 ； ⑵ cDNA第二條鏈的合成； ⑶ 對 DNA3?突出末端進行標(biāo)記； ⑷ DNA序列分析。 這兩個相同的粘性末端稱為配伍未端 (patible end)。 粘性末端 (sticky end) 是指經(jīng)內(nèi)切酶特異切割后產(chǎn)生的 5ˊ －末端突出和3ˊ －末端突出的堿基序列相互間具有互補性 。 (2) 分類、作用 ?Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅲ （基因工程技術(shù)中常用 Ⅱ 型） 第一個字母取自產(chǎn)生該酶的細菌屬名第一個字母 ， 用大寫 ； 第二、第三個字母是該細菌種名的前兩個字母，用小寫 ； 第四個字母代表菌株類型 ； 如果菌株有幾種酶，在代表菌株的字母后用羅馬數(shù)字表示。按功能將工具酶分類， 可分為 剪切酶類、 連接酶類和修飾酶類 如下所示 分子剪刀和分子針線 （二）、基因工程的工具酶 (restriction endonuclease, RE) (1) 定義 是一類由細菌產(chǎn)生的能專一識別和 切割雙鏈DNA中的特定堿基序列的核酸內(nèi)切酶，簡稱 限制酶或 切割酶 ?？沙洚?dāng)克隆載體的 DNA分子有質(zhì)粒 DNA、噬菌體 DNA和病毒 DNA。這是為“攜帶”感興趣的外源 DNA、實現(xiàn)外源 DNA的無性繁殖或表達有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些DNA分子。 （一）、基因工程的相關(guān)概念 有時應(yīng)用重組 DNA技術(shù)的分離、獲得某一感興趣的基因或DNA序列，有時是為獲得感興
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