基因工程制藥(編輯修改稿)
2025-01-23 13:33 本頁面
【文章內容簡介】 。 ⒉ 用 32P標記 5’ 端前，去除 5’ P，再通過激酶作用把放射性核苷酸加到 539。端進行標記 。 （脫氧核苷酸）轉移酶 (TdT) 作用 將標記或未標記的 dNTP加到 DNA的 3’ OH末端；也可催化載體分子或待克隆的 DNA片段上加上互補的同聚尾 ， 便于進一步連接 。 應用 ① 探針標記 G32G32G32G32 G32G32G32G32 ② 在載體和待克隆的片段上形成同聚物尾 ， 以便于進行連接 3180。 3180。 重要的工具酶 工具酶 活性 限制性核酸內切酶 （ Ⅱ 型） 識別特異堿基序列，切割 DNA T4 DNA連接酶 催化 DNA5’ 磷酸與 3’ 羥基 形成磷酸二酯鍵 DNA聚合酶 以 DNA為模板合成 DNA 逆轉錄酶 以 RNA為模板合成 cDNA 堿性磷酸酶 切除 5’ 末端磷酸 末端轉移酶 催化 3’ 端合成同聚尾 基因工程的載體是為“攜帶”感興趣的外源 DNA、實現(xiàn)外源DNA的無性繁殖或表達有意義的蛋白質所采用的一些 DNA分子。 （三）、基因工程的載體 常用載體 (vector) 來源分類 ：質粒載體 噬菌體載體 病毒載體 人工染色體載體 用途分類 ：克隆載體 表達載體 穿梭載體 克隆載體 (cloning vector) 能使插入的外源 DNA序列被復制 、 擴增而不能表達 ， 這樣的載體為 克隆載體 。 表達載體 (expression vector) 使插入的外源 DNA序列轉錄翻譯 ， 表達出多肽鏈 ， 這樣的載體稱為 表達載體 。 這類載體中含有來源不同的復制子結構，既具備 原核細胞 復制所需的序列結構，又具有能使外源片段在 真核細胞 表達所需的結構元件和相應的選擇標記基因 ,故能在兩種受體細胞中復制并檢測，克隆的外源基因在此類載體直接從一種受體轉入另一種受體中進行復制和表達． 穿梭載體（ shuttle vector) ①具有能使外源 DNA片段組入的克隆位點。 ②能攜帶外源 DNA進入受體細胞，或游離在細胞質中進行自我復制，或整合到染色體 DNA上隨染色體 DNA的復制而復制。 ③必須具有選擇標記，承載外源 DNA的載體進入受體細胞后，以便篩選克隆子。 ④分子量小，拷貝數(shù)高。 ⑤具有較高的遺傳穩(wěn)定性。 基因克隆載體必須具備三個條件 松弛型的復制子、多克隆位點、 篩選標記 . 常見 :質粒、噬菌體 ◆ 克隆載體必需結構 : 具有 復制子 ， 篩選標記 ，位于多克隆位點的上下游具有轉錄效率較高的 啟動子 ，起始密碼子和核糖體結合位點 ， 轉錄終止子 結構． ◆ 表達載體結構特點： 三、基因工程技術所生產的藥物 傳統(tǒng)方法很難生產的，主要是藥用活性蛋白質和多肽類，包括： （ 1） 免疫蛋白質 各種抗原、單克隆抗體、乙肝疫苗。 （ 2） 細胞因子 各種干擾素、白細胞介素、集落刺激生長因子、表皮生長因子、凝血因子、促紅細胞生成素。 （ 3）激素 胰島素、生長激素、心鈉素、人腦激素。 （ 4）酶類 尿激酶、鏈激酶、葡聚糖酶、組織型纖維蛋白溶解酶原激活劑、超氧化物歧化酶、 a淀粉酶、凝乳酶、人溶菌酶、胰蛋白酶抑制劑。 四、基因工程制藥的優(yōu)點 （ 1）利用基因工程技術可以生產出過去難以獲得的生理活性蛋白和多肽。 （ 2）可以通過 大批量 的生產方法獲得足夠數(shù)量的生物活性物質。 （ 3）利用基因工程技術可以發(fā)掘出更多的內源性生理活性物質。 （ 4）利用基因工程技術和蛋白質工程技術可以對藥物蛋白進行 修飾和改造 ，來提高藥效價值和獲得新型的化合物。 五、基因工程制藥所使用的生物技術 （ 1） DNA重組技術 （ 2）淋巴細胞雜交瘤技術 （ 3）細胞培養(yǎng)技術 （ 4）克隆表達技術 六、我國基因工程制藥的進展 α 1b型基因工程干擾素 ，是我國自行研究開發(fā)的具有國際先進水平的基因工程藥物，于 1997年通過 III期臨床，并獲得國家 一類新藥證書 。它源于中國人基因，最適于黃種人使用。 目前，我國已經批準了 12種基因工程藥物和疫苗上市。 七、基因工程制藥生產的化學工藝學要求 （ 1）工程菌大規(guī)模 發(fā)酵工藝 最佳參數(shù)的確立 （ 2）新型生物反應器的研制 （ 3）高效 分離介質 和裝置的開發(fā) （ 4）分離 純化技術 的優(yōu)化控制 （ 5）高純度產品的制備技術 （ 6）生物傳感器等儀器儀表的設計和制造 （ 7）電子計算機的智能優(yōu)化控制 八、基因工程的發(fā)展 （一）基因工程的歷史 （二）基因工程所生產的產品 （三）基因工程 的發(fā)展方向 （一）基因工程的歷史 ? 1973年 Cohen第一例成功的克隆實驗。 ? 1978年 Genentech公司生產出世界上第一種基因工程蛋白藥物 人胰島素。 ? 1982年 第一個基因工程藥物重組人胰島素在英、美獲準使用。 ? 八十年代中期 PCR技術發(fā)明 ? 1985年 第一批轉基因家畜（兔、豬和羊）培育成功。 ? 1999年 9月 中國獲準加入人類基因組計劃，負責測定人類基因組全部序列的 1% ? 2023年 6月 26日 科學家公布人類基因組工作草圖。 ? 2023年 4
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