植物基因工程(編輯修改稿)
2025-02-03 04:55 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 步驟都在大腸桿菌里操作。 ? 幫助質(zhì)粒（ helper plasmid） 受體農(nóng)桿菌內(nèi)要求帶有整套 vir基因（但缺失 TDNA及左右邊界）的“幫助質(zhì)?！碧峁?vir產(chǎn)物。 左 右 外源基因 雙元載體 Vir 幫助質(zhì)粒 農(nóng)桿菌 Vir 農(nóng)桿菌 左 右 外源基因 感染植物 轉(zhuǎn)化 左 右 外源基因 進(jìn)入植物細(xì)胞核，整合，表達(dá) ? 雙元系統(tǒng)是 穿梭質(zhì)粒 和 Ti質(zhì)粒 兩個(gè) 質(zhì)粒 ，在接合后可以自主性地共存于同一農(nóng)桿菌細(xì)胞中。 ? 穿梭質(zhì)粒編碼植物選擇標(biāo)記、 表達(dá)信號(hào)、 多克隆位點(diǎn)、 兩個(gè) TDNA ? 雙元系統(tǒng)中的 Ti 具有 Vir基因和農(nóng)桿菌復(fù)制起始子 (OriA)，但沒(méi)有 TDNA邊界序列。 ? 接合后，兩個(gè)質(zhì)?？梢宰灾鞴泊嬗谕晦r(nóng)桿菌細(xì)胞中。 穿梭質(zhì)粒可在農(nóng)桿菌內(nèi)自主復(fù)制 ? 插入外源基因的重組穿梭質(zhì)粒直接轉(zhuǎn)化含有 Ti質(zhì)粒的根瘤農(nóng)桿菌，經(jīng)篩選后直接感染植物細(xì)胞。 雙元系統(tǒng)的特點(diǎn) 三、植物細(xì)胞的直接轉(zhuǎn)化程序 ?槍擊法 將待轉(zhuǎn)化的 DNA沉淀在細(xì)小金屬珠的表面 ， 用特制槍將金屬珠直接打入植物細(xì)胞 ， 槍的威力為430 m / s， 植物細(xì)胞通常是胚胎細(xì)胞 、 玉米籽 、葉子等 ， 但進(jìn)去的 DNA片段整合效率極低 。 基因槍介導(dǎo)的 DNA轉(zhuǎn)移 ? 基因槍法最早是由美國(guó)康奈爾大學(xué)的Sanford最先提出的。它通過(guò)高速飛行的金屬顆粒將包被其外的目的基因直接導(dǎo)入到受體細(xì)胞內(nèi)，從而實(shí)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)化的方法。 1992年，世界首例轉(zhuǎn)基因小鼠就是通過(guò)該法獲得的。 Gene Gun Gene guns and electric shocks transfer DNA into plant cells 基因槍 電擊法 ? 將高濃度的質(zhì)粒 DNA加入到植物細(xì)胞的原生質(zhì)體懸浮液中 ， 混合物在 200 600 V / cm 的電場(chǎng)中處理若干秒鐘 ， 然后將原生質(zhì)體在組織培養(yǎng)基中生長(zhǎng) 1 2 周 ， 再生出整株植物 。 融合法 ? 將外源 DNA與特殊的疏水性高分子化合物混合 ，在水中這些疏水性化合物分子形成球狀的 脂質(zhì)體 ，后者與植物細(xì)胞原生質(zhì)體融合 ， 篩選融合子 ， 再生植物細(xì)胞壁 。 ? 所有涉及到植物原生質(zhì)體的基因轉(zhuǎn)化方法均存在一個(gè)難題，即：原生質(zhì)體很難再生出整株植物。 植物原生質(zhì)體的再生程序 四 . 轉(zhuǎn)基因植物的基因鑒定 轉(zhuǎn)基因植物的基因鑒定方法 1. 表型 抗性基因 4. southernblotting 5. northernblotting 6. westernblotting （ 一）利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究基因的表達(dá)與調(diào)控 報(bào)告基因（ reporter gene ）：是一種編碼可被檢測(cè)的蛋白質(zhì)或酶的基因。 （二）利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)功能蛋白和工業(yè)原料 （三）植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)在植物品種改良中的應(yīng)用 五、植物基因工程的應(yīng)用 目前植物中常用的報(bào)告基因： （ 1）大腸桿菌的 β 葡萄糖苷酸酶（ GUS）
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