基因工程的過(guò)程(編輯修改稿)
2025-01-25 17:40 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 什么？ 不可以。因?yàn)槟康幕蛟诒磉_(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件，如 啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因 等。 ① 載體 與 表達(dá)載體 的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分 DNA片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動(dòng)子、終止子三部分結(jié)構(gòu) ② 用到的工具酶：限制酶、 DNA連接酶 ③ 啟動(dòng)子、終止子 對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少 ④ 目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞， 必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。 注意 ? 常用的受體細(xì)胞： 原核生物：大腸桿菌 枯草桿菌 土壤農(nóng)桿菌 真核生物：酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞 ? 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的原理 借鑒 細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞 的途徑。 轉(zhuǎn)化： 目的基因進(jìn)入 _________內(nèi)，并且在 受體細(xì)胞內(nèi)維持 _____和 _____的過(guò)程 受體細(xì)胞 穩(wěn)定 表達(dá) 三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 將目的基因?qū)?植物細(xì)胞 （ 1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 特點(diǎn) : 能感染 雙子葉植物 和 祼子植物 ,對(duì)大多數(shù)單子葉植物無(wú)感染能力 Ti質(zhì)粒 的 T— DNA可 轉(zhuǎn)移 至受體細(xì)胞并 整合 到其染色體上 轉(zhuǎn)化過(guò)程 : Ti質(zhì)粒 目的基因 構(gòu)建 表達(dá)載體 導(dǎo)入 植物細(xì)胞 整合 植物細(xì)胞染色體 DNA 表達(dá) 新性狀 轉(zhuǎn)入 農(nóng)桿菌 整合 到染色體上 轉(zhuǎn)移 至受體細(xì)胞 （ 2） 基因槍法 —— 微彈轟擊法 特點(diǎn)：成本高 適用于 單子葉植物 基因槍法又稱微彈轟擊法，是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力，將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體 DNA打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法。 胚珠 花藥 花絲 柱頭 花柱 子房壁 子房 雄蕊 雌蕊 （ 3）花粉通道法 植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要穿過(guò)花柱直通胚囊?；ǚ酃芡ǖ婪ň褪窃谥参锸芊酆?，花粉形成的花粉管還未愈合前，剪去柱頭，然后，滴加 DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞。 我國(guó)轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉就是用這種方法獲得 將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞 方法 : 顯微注射技術(shù) 操作程序 : 提純含目的基因表達(dá)載體 取受精卵 顯微注射 移植到子宮 早期胚胎 新性狀動(dòng)物 將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞 常用法 ： Ca2+處理 常用菌 ：大腸桿菌 微生物作受體細(xì)胞原因： 繁殖快 、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)少 過(guò)程： Ca2+處理大腸桿菌 感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合 感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA 小結(jié)：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 轉(zhuǎn)化 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉管通道法 顯微注射技術(shù) Ca2+處理 植物基因工程 動(dòng)物基因工程 微生物基因工程 常用方法 受體細(xì)胞 比較目的基因?qū)氩煌?xì)胞的方法 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 顯微注射法 Ca2+處理法 體細(xì)胞 受精卵 原核細(xì)胞 基因工程中科學(xué)家常用細(xì)菌、酵母菌等微生物作為受體細(xì)胞，原因是 A．結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作方便 B．繁殖速度快 C．遺傳物質(zhì)含量少、簡(jiǎn)單 D．性狀穩(wěn)定、變異少 基因工程常用的受體細(xì)胞有 ①大腸桿菌 ②枯草桿菌 ③支原體 ④動(dòng)植物細(xì)胞 A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．①②④ B D 檢測(cè) ①導(dǎo)入檢測(cè)：目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞 方法 —— DNA分子雜交 ②表達(dá)檢測(cè) 轉(zhuǎn)錄檢測(cè) —— 分子雜交 翻譯檢測(cè) —— 抗原抗體 雜交 分子檢測(cè)法 鑒定 抗蟲(chóng)鑒定 抗病鑒定 活性鑒定等 個(gè)體水平的鑒定 四、目的基因的表達(dá)和檢測(cè) （一）、檢測(cè) 檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的 DNA上是否插入了目的基因 (關(guān)鍵步驟 ) ① .首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組 DNA ② .用含目的基因的 DNA片段用放射性同位素等作標(biāo)記 ,以此做探針 ③ .使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交 ,若顯示出雜交帶 ,表明染色體已插入染色體 DNA中 （ 1） 方法 : DNA分子雜交 （ 2）過(guò)程 : 檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA 檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等 ① 方法 : 分 子 雜 交 方法 : 抗原抗體雜交 ② 過(guò)程 : 用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的 mRNA雜交 ,若出現(xiàn)雜交帶 ,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了 mRNA 二、個(gè)體水平鑒定：
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