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正文內(nèi)容

基因工程及其應(yīng)用(編輯修改稿)

2025-01-25 17:38 本頁(yè)面
 

【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 程的基本內(nèi)容 中央電教館資源中心 提取目的基因 將需要的基因從供體生物的細(xì)胞內(nèi)提取出來(lái)。 取 出DNA 用限制酶切斷 DNA 目前被較廣泛提取使用的目的基因有:蘇云金桿菌抗蟲(chóng)基因、人胰島素基因、人干擾素基因、種子貯藏蛋白基因、植物抗病基因等。 28 基因工程的基本內(nèi)容 中央電教館資源中心 提取目的基因的方法(一) ? 直接分離基因 —— 鳥(niǎo)槍法 將供體生物的 DNA用限制酶切割為許多片段,再用運(yùn)載體將這些片段都運(yùn)載到受體生物的不同細(xì)胞中去。只要有一個(gè)細(xì)胞獲得了需要的目的基因并得以表達(dá),基因工程就算成功了。 該法最大的缺點(diǎn)是帶有很大的盲目性,工作量大,成功率低。且不能將真核生物的基因轉(zhuǎn)移到原核生物中去。 用限制酶切成許多片斷 29 基因工程的基本內(nèi)容 中央電教館資源中心 提取目的基因的方法(二) ? 人工基因合成法 1. 逆轉(zhuǎn)錄法:以信使 RNA為模板,在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下將脫氧核苷酸合成合成 DNA(基因 )。 2. 直接合成法:根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸順序推算出信使 RNA核苷酸順序,再據(jù)此推算出基因 DNA的脫氧核苷酸順序。用游離脫氧核苷酸直接合成相應(yīng)的基因。 DNA合成儀 PCR擴(kuò)增儀 30 基因工程的基本內(nèi)容 中央電教館資源中心 目的基因與運(yùn)載體結(jié)合 ? 用與提取目的基因相同的限制酶切割質(zhì)粒使之出現(xiàn)一個(gè)切口,將目的基因插入切口處,讓目的基因的黏性末端與切口上的黏性末端互補(bǔ)配對(duì)后,在連拉酶的作用下連接形成 重組 DNA分子 。 提取質(zhì)粒并用限制酶切割 用連接酶將目的基因和質(zhì)粒連接 31 基因工程的基本內(nèi)容 中央電教館資源中心 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞并擴(kuò)增 ?基因工程中常用的受體細(xì)胞有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。 ?導(dǎo)入受體細(xì)胞常用的方法是借鑒細(xì)菌或者病毒侵染細(xì)胞的途徑。通常還要對(duì)一些受體細(xì)胞進(jìn)行增大通透性的處理。 ?目的基因可以隨著受體細(xì)胞進(jìn)行快速的繁殖,在很短的時(shí)間內(nèi)獲得大量的基因。 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 將受體細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增 32 基因工程的基本內(nèi)容 中央電教館資源中心 目的基因的檢測(cè)和表達(dá)(一) 前三步的處理十分繁鎖,為保證目的基因得到有效利用,通常用大量的受體細(xì)胞來(lái)接受不多的目的基因。這樣,處理的受體細(xì)胞中真正攝入了目的基因的很少,必須將它從中檢測(cè)出來(lái)。 細(xì)菌的檢測(cè),將每個(gè)受體細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)形成菌落,檢測(cè)菌落中是否有目的基因的表達(dá)產(chǎn)物。淘汰無(wú)表達(dá)
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