【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 因?qū)氲讲溉閯?dòng)物體內(nèi)，使目的基因在哺乳動(dòng)物身上表達(dá)，從而獲得藥用蛋白?；蚬こ碳夹g(shù)制藥展望基因工程技術(shù)在醫(yī)藥工業(yè)中的應(yīng)用非常廣泛。隨著人類基因組計(jì)劃的完成，以及基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、生物信息學(xué)等研究的深入，為醫(yī)藥生物技術(shù)開拓了一個(gè)新的領(lǐng)域，基因工程制藥將有更多機(jī)會(huì)獲得突破性進(jìn)展，為保障人類健康做出更大的貢獻(xiàn)。參考文獻(xiàn)：[1] 張?zhí)烀?基因工程藥物淺釋[J].山東肉類科技,1997,1． [2] 李擁軍,基因工程藥物及其產(chǎn)業(yè)化發(fā)展[J].生產(chǎn)力研究,2003,3：185.[3] 闞勁松,吳克,基因工程制藥研究進(jìn)展[J].合肥聯(lián)合大學(xué)學(xué)報(bào)，2000,10(4):108.[4] 唐冬生，夏家輝，新型基因工程藥物[J].生命科學(xué)研究，1999,3(2):93.[4] 袁建民等,動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器研究進(jìn)展,中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),(2):20.[5] 韓玉剛，李建凡，動(dòng)物生物反應(yīng)器的現(xiàn)狀和進(jìn)展[J].國(guó)外畜牧科技，2002，29(1):3033[6] 張忠誠(chéng),動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器的原理及研究進(jìn)展,中國(guó)奶牛,2006,4：29.[7] 孔秀英 ,孫秀杰，基因治療，生物學(xué)雜志[J].2005,7(2):63.[8] 陳詩(shī)書，人類基因治療研究的新進(jìn)展，生物工程進(jìn)展[J].1994,14(1)：30.[9] 張明徽，基因治療的現(xiàn)狀與展望，世界科學(xué)[J].1995，10：2021.[10] 羅登，基因治療新時(shí)期，生物工程進(jìn)展，1994，14(4)：2829.[22] 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通過講授基因工程制藥的概貌及國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展、基因工程制藥常用的工具酶和克隆載體、基因工程藥物無性繁殖系的組建以及基因工程藥物的生產(chǎn)和質(zhì)量控制等, 使學(xué)生對(duì)基因工程的基本理論、基本步驟和操作技術(shù)以及基因工程藥物的生產(chǎn)技術(shù)原理和方法有比較系統(tǒng)的了解, 初步掌握基因工程制藥有關(guān)基本知識(shí)。三、課程適用專業(yè)本課程適用于生物技術(shù)專業(yè)等相關(guān)專業(yè)。四、教學(xué)內(nèi)容、要求與學(xué)時(shí)分配第一章 基因工程制藥概述(2學(xué)時(shí))第一節(jié)：基因工程的概貌 簡(jiǎn)述基因工程的誕生和興起，基因工程的定義、特點(diǎn)與基本步驟，基因工程早期的開創(chuàng)性研究成就，基因工程的應(yīng)用與發(fā)展趨勢(shì)等。第二節(jié)：基因工程與生物制藥 簡(jiǎn)述基因工程藥物的研究和發(fā)展概況，介紹應(yīng)用基因工程和蛋白質(zhì)工程技術(shù)研究開發(fā)的幾種新型基工藥物。第二章 基因工程制藥常用的工具酶(2學(xué)時(shí))第一節(jié)：限制性核酸內(nèi)切酶 簡(jiǎn)述限制酶的發(fā)現(xiàn)、限制酶的種類、限制酶的命名和限制酶的特性與用途等。第二節(jié) DNA連接酶 重點(diǎn)介紹DNA連接酶連接作用的特點(diǎn)，基因工程中常用的連接酶(T4噬菌體DNA連接酶、大腸桿菌DNA連接酶)的酶活性和用途，DNA連接酶連接作用的分子機(jī)理。第三節(jié) DNA聚合酶 重點(diǎn)介紹大腸桿菌DNA聚合酶Klenow大片段酶、T4噬菌體DNA聚合酶、TaqDNA聚合酶及、反轉(zhuǎn)錄酶等的酶活性和用途。第四節(jié) DNA修飾酶 重點(diǎn)介紹末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶、T4噬菌體多核苷酸激酶等的酶活性和用途。第五節(jié) 單鏈核酸內(nèi)切酶 重點(diǎn)介紹S1核酸酶、Bal31核酸酶等的酶活性和用途。第三章 基因工程制藥常用的克隆載體(4學(xué)時(shí))第一節(jié) 質(zhì)粒載體 內(nèi)容：質(zhì)粒的定義、質(zhì)粒DNA分子的特性、質(zhì)粒載體的改造及構(gòu)建。重點(diǎn)介紹基因工程制藥中常用的幾種質(zhì)粒載體的結(jié)構(gòu)和用途，主要包括pBR322及其衍生栽體、pUC系列載體。第二節(jié) λ噬菌體載休 內(nèi)容：λ噬菌體的基本特性、λ噬菌體基因組的結(jié)構(gòu)與功能、λ噬菌體DNA的改造及其載體的構(gòu)建。重點(diǎn)介紹基因工程制藥中常用的幾種λ噬菌體載體，主要包括 Charon系列載體、EMBL系列載體、λgt系列載體。第三節(jié) M13噬菌體載體 內(nèi)容包括：M13噬菌體的基本特性、M13絲狀噬菌體載體的構(gòu)建、常用的M13噬菌體載體，主要包括M13mp18和M13mp19載體。第四節(jié) 粘粒（Cosmid）載體 內(nèi)容：粘粒載體的構(gòu)建、常用的粘粒載體。第五節(jié) 哺乳動(dòng)物細(xì)胞載體系統(tǒng) 主要介紹：SV40載體、BPV載體、EBV病毒載體。第四章 目的基因的制取(2學(xué)時(shí))第一節(jié) 目的基因的化學(xué)合成 內(nèi)容：目的基因的設(shè)計(jì), 寡聚核苷酸片段的合成, 寡核苷酸片段的分離和純化, 用寡核苷酸片段組裝目的基因, 化學(xué)合成寡核苷酸的其它用途。第二節(jié) 構(gòu)建基因文庫(kù)法分離目的基因 內(nèi)容：構(gòu)建基因文庫(kù)法分離目的基因的基本步驟, 真核基因組DNA文庫(kù)的構(gòu)建過程第三節(jié) 酶促合成法制取目的基因 內(nèi)容：真核生揚(yáng)細(xì)胞中的mRNA, 從構(gòu)建 的cDNA文庫(kù)中篩選目的cDNA, RTPCR法合成目的cDNA。第五章 目的基因與克隆載體的體外重組(2學(xué)時(shí))第一節(jié) 目的基因與質(zhì)粒載體的連接 內(nèi)容：粘性末端連接法, 定向克隆法,平末端連接法, 同聚物加尾法, 加人工接頭連接法, 加DNA銜接物連接法, 其它轉(zhuǎn)換末端形式連接法。第二節(jié) 目的基因與噬菌體載體的連接 內(nèi)容包括：噬菌體載體臂DNA的制備, 噬菌體載體臂與外源目的DNA片段的連接。第六章 重組克隆載體引入受體細(xì)胞(2學(xué)時(shí))第一節(jié) 概述 內(nèi)容：基因工程的受體細(xì)胞, 重組體分子導(dǎo)入受體細(xì)胞的途徑。第二節(jié) 重組體DNA分子的轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染 內(nèi)容包括：用氯化鈣制備新鮮的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化法, 用復(fù)合劑制備感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化法, 高壓電穿孔轉(zhuǎn)化法。第三節(jié) 重組噬菌體DNA的體外包裝與轉(zhuǎn)染 內(nèi)容：噬菌體體外包裝的基本原理, 噬菌體DNA的體外包裝, 包裝提取物的制備, 重組DNA的體外包裝與感染方法。第四節(jié) 重組克隆載體導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的轉(zhuǎn)染第七章 含目的基因重組體的篩選、鑒定與分析(6學(xué)時(shí))第一節(jié) 重組體(菌)的篩選 內(nèi)容：抗生素抗性基因插入失活法, b半乳糖苷酶 基因插入失活法, 快速細(xì)胞破碎與凝膠電泳篩選法, 放射性標(biāo)記核酸探針雜交篩選法, 免疫化學(xué)篩選法。第二節(jié) 重組體的鑒定 內(nèi)容：酶切及凝膠電泳鑒定法, Southern印跡雜交法, 電鏡R環(huán)檢測(cè)法, 基因產(chǎn)物鑒定法。第三節(jié) 重組DNA的序列分析 內(nèi)容：Sanger雙脫氧鏈終止法DNA測(cè)序, MaxamGilbert化學(xué)修飾法DNA測(cè)序。第八章 目的基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)(2學(xué)時(shí))第一節(jié) 外源目的基因在原核細(xì)胞中的表達(dá) 內(nèi)容：原核基因表達(dá)載體的構(gòu)建, 常見的原核細(xì)胞表達(dá)載體系統(tǒng), 外源目的基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)形式, 在原核細(xì)胞中高效表達(dá)目的基因, 基因定點(diǎn)誘變技術(shù)。第二節(jié) 外源目的基因在真核細(xì)胞中的表達(dá) 內(nèi)容：真核細(xì)胞表達(dá)載體的功能元件, 酵母菌表達(dá)系統(tǒng), 哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。第九章 基因工程無性繁殖系的組建(2學(xué)時(shí))內(nèi)容：人胰島素原融合蛋白重組菌的組建, 人a2b型干擾素工程菌的組建, 集落刺激因子工程菌的組建, 白細(xì)胞介素融合蛋白工程菌的組建, 乙型肝炎表面抗原重組酵母的組建, 人組織型纖溶酶原激活劑細(xì)胞株的組建, 紅細(xì)胞生成素CHO細(xì)胞株的組建, 人腫瘤壞死因子昆蟲細(xì)胞株的組建。第十章 基因工程藥物的生產(chǎn)(2學(xué)時(shí))第一節(jié) 基因工程菌（細(xì)胞）的培養(yǎng)與發(fā)酵 內(nèi)容包括：工程細(xì)菌的培養(yǎng)與發(fā)酵, 工程酵母的培養(yǎng)與發(fā)酵, 工程細(xì)胞的培養(yǎng)與發(fā)酵。第二節(jié) 基因工程藥物的分離純化 內(nèi)容包括：影響分離純化工藝的主要因素, 各種產(chǎn)物表達(dá)形式采用的分離純化方法,。第三節(jié) 基因工程藥物的分離純化實(shí)例 內(nèi)容包括：以包涵體形式表達(dá)的rGMCSF中試分離純化, 以分泌型表達(dá)的人a1干擾素的分離純化, 以可溶性形式表達(dá)的rhGCSF的分離純化, 在酵母中表達(dá)的HBsAg的分離純化。第十一章 基因工程藥物的檢驗(yàn)(學(xué)生自學(xué))第一節(jié) 基因工程藥物的質(zhì)量控制 內(nèi)容包括：主要的基因工程藥物, 基因工程藥物的特點(diǎn), 基因工程藥物的質(zhì)量要求, 基因工程藥物的質(zhì)控要點(diǎn), 基因工程藥物的制造及檢定規(guī)程。第二節(jié) 基因工程藥物常用的檢驗(yàn)方法 內(nèi)容：化學(xué)檢定法, 肽圖分析法，外源性DNA殘留量的測(cè)定，宿主細(xì)胞蛋白雜質(zhì)的檢測(cè)，無菌試驗(yàn)，內(nèi)毒素試驗(yàn)，異常毒性試驗(yàn)，熱原質(zhì)試驗(yàn)，生物學(xué)活性(效價(jià))檢定。第三節(jié) 主要基因工程藥物的檢驗(yàn) 內(nèi)容：重組人胰島素的檢驗(yàn)，重組人生長(zhǎng)激素的檢驗(yàn)，重組人干擾素的檢驗(yàn)，重組人白細(xì)胞介