基因工程制藥-wenkub
2023-01-24 13:33:28 本頁(yè)面
【正文】 平端或鈍端 回文序列 (palindrome) 是指該部位的核苷酸序列呈 180O反向重復(fù) 。 克隆和進(jìn)行基因操作需要對(duì)遺傳物質(zhì)進(jìn)行剪切、修飾和連接，這些過(guò)程都是在工具酶的催化下完成的。 也稱克隆載體。 （三）、基因工程的研究?jī)?nèi)容 二、基因工程相關(guān)概念及基本工具 克隆指同一副本或拷貝集合。將這種工程化的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，在含有四環(huán)素和青霉素的平板中篩選重組菌落。 Lederberg開(kāi)始從事細(xì)菌性因子（ F因子）研究。 1970年 Smith和 Wilcox在流感嗜血桿菌中分離并純化限制性內(nèi)切酶 Hind Ш ，使 DNA分子的切割成為可能?；蚬こ讨扑? 第一節(jié) 概述 第二節(jié) 基因工程基本技術(shù)與策略 第三節(jié) 基因藥物生產(chǎn)的基本過(guò)程 第四節(jié) 基因工程藥物制造實(shí)例 第一節(jié) 概述 一、基因工程建立的基礎(chǔ) 二、基因工程的相關(guān)概念及相關(guān)酶學(xué) 三、基因工程技術(shù)所生產(chǎn)的藥物 四、基因工程制藥的優(yōu)點(diǎn) 五、基因工程制藥所使用的生物技術(shù) 六、我國(guó)基因工程制藥的進(jìn)展 七、基因工程制藥生產(chǎn)的化學(xué)工藝學(xué)要求 八、基因工程的發(fā)展 一、基因工程建立的基礎(chǔ) （一）、理論方面的三個(gè)重要的發(fā)現(xiàn) — DNA的發(fā)現(xiàn) 2. DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)和半保留復(fù)制機(jī)理的建立 1953年，沃森 (Watson） 和克里克 （ Crick） 首次提出了 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)和半保留復(fù)制機(jī)理。 1979年， Bltimore和 Temin領(lǐng)導(dǎo)的兩個(gè)研究小組分別在各自的工作中發(fā)現(xiàn)了逆轉(zhuǎn)錄酶。 20世紀(jì) 5060年代，相繼發(fā)現(xiàn)其他質(zhì)粒，如抗藥性基因（ R因子）和大腸桿菌因子（ CoE）。 同年，加利福尼亞的 博耶（ Boyer） 也進(jìn)行了類似的實(shí)驗(yàn)。從眾多不同的分子群體中分離的某一感興趣分子，經(jīng)擴(kuò)增產(chǎn)生很多相同分子集合，即為分子克隆。這是為“攜帶”感興趣的外源 DNA、實(shí)現(xiàn)外源 DNA的無(wú)性繁殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些DNA分子。按功能將工具酶分類， 可分為 剪切酶類、 連接酶類和修飾酶類 如下所示 分子剪刀和分子針線 （二）、基因工程的工具酶 (restriction endonuclease, RE) (1) 定義 是一類由細(xì)菌產(chǎn)生的能專一識(shí)別和 切割雙鏈DNA中的特定堿基序列的核酸內(nèi)切酶，簡(jiǎn)稱 限制酶或 切割酶 。 粘性末端 (sticky end) 是指經(jīng)內(nèi)切酶特異切割后產(chǎn)生的 5ˊ －末端突出和3ˊ －末端突出的堿基序列相互間具有互補(bǔ)性 。 包括： 5ˊ→3ˊDNA 聚合酶活性 5ˊ→3ˊ 核酸外切酶活性 3ˊ→5ˊ 核酸外切酶活性 DNA pol Ⅰ 應(yīng)用 ⑴ 常用來(lái) 催化 DNA缺口平移反應(yīng)，制備高比活性 DNA 探針 ； ⑵ cDNA第二條鏈的合成； ⑶ 對(duì) DNA3?突出末端進(jìn)行標(biāo)記； ⑷ DNA序列分析。 539。 339。 339。 339。 特點(diǎn) 逆轉(zhuǎn)錄酶是一個(gè)多功能性酶，至少具有以下 3種酶 活性： ⑴ 以單鏈 RNA為模板， 催化合成 cDNA單鏈 ⑵ 具有 RNase H 活性，能水解 RNA:DNA雜交鏈中的 RNA ⑶ 以 DNA為模板， 催化合成 cDNA雙鏈。339。539。339。539。 6. DNA連接酶 (DNA ligase) 催化雙鏈 DNA中一條鏈的 3’ OH與另一條鏈的 5’ PO3H2形成磷酸二酯鍵 ， 從而構(gòu)成完整的 DNA長(zhǎng)鏈 。端進(jìn)行標(biāo)記 。 重要的工具酶 工具酶 活性 限制性核酸內(nèi)切酶 （ Ⅱ 型） 識(shí)別特異堿基序列，切割 DNA T4 DNA連接酶 催化 DNA5’ 磷酸與 3’ 羥基 形成磷酸二酯鍵 DNA聚合酶 以 DNA為模板合成 DNA 逆轉(zhuǎn)錄酶 以 RNA為模板合成 cDNA 堿性磷酸酶 切除 5’ 末端磷酸 末端轉(zhuǎn)移酶 催化 3’ 端合成同聚尾 基因工程的載體是為“攜帶”感興趣的外源 DNA、實(shí)現(xiàn)外源DNA的無(wú)性繁殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些 DNA分子。 ②能攜帶外源 DNA進(jìn)入受體細(xì)胞，或游離在細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行自我復(fù)制，或整合到染色體 DNA上隨染色體 DNA的復(fù)制而復(fù)制。 基因克隆載體必須具備三個(gè)條件 松弛型的復(fù)制子、多克隆位點(diǎn)、 篩選標(biāo)記 . 常見(jiàn) :質(zhì)粒、噬菌體 ◆ 克隆載體必需結(jié)構(gòu) : 具有 復(fù)制子 ， 篩選標(biāo)記 ，位于多克隆位點(diǎn)的上下游具有轉(zhuǎn)錄效率較高的 啟動(dòng)子 ，起始密碼子和核糖體結(jié)合位點(diǎn) ， 轉(zhuǎn)錄終止子 結(jié)構(gòu)． ◆ 表達(dá)載體結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：
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