14基因重組和基因工程ppt-powerpoint演示-資料下載頁(yè)
2025-01-14 23:37本頁(yè)面
【正文】 。C 重組體 目 錄 目 錄 4. 人工接頭 (linker)連接 由平端加上新的酶切位點(diǎn)，再用限制酶切除產(chǎn)生粘性末端，而進(jìn)行粘端連接 。 人工接頭及其應(yīng)用 CCGAATTCG GGCTTAAGC 5180。 3180。 Eco RⅠ Eco RⅠ Eco RⅠ Eco RⅠ 目 錄 目 錄 受體菌條件 安全宿主菌 限制酶和重組酶缺陷 處于感受態(tài) (petent) 導(dǎo)入方式 轉(zhuǎn)化 (transformation) 轉(zhuǎn)染 (transfection) 感染 (infection) （四）重組 DNA導(dǎo)入受體菌 目 錄 （五）重組體的篩選 1. 直接選擇法 (1) 抗藥性標(biāo)記選擇 (2) 標(biāo)志補(bǔ)救 (marker rescue) (3) 分子雜交法 原位雜交 Southern印跡 2. 免疫學(xué)方法 如免疫化學(xué)方法及酶免檢測(cè)分析等 (插入失活法) 抗藥性標(biāo)記選擇 目 錄 組氨酸缺陷 型大腸桿菌 無組氨酸 的培養(yǎng)基 酵母咪唑甘油磷 酸脫水酶基因 促進(jìn)組氨酸合成 λDNA 重組體 標(biāo)志補(bǔ)救 目 錄 α互補(bǔ) 目 錄 α 互補(bǔ)的檢測(cè) 目 錄 原位雜交 目 錄 Southern印跡 目 錄 雞的 β肌球蛋白的克隆和檢出 目 錄 目 錄 重組 DNA技術(shù)操作過程可形象歸納為 小 結(jié) 分 分離目的基因 切 限制酶切目的基因與載體 接 拼接重組體 轉(zhuǎn) 轉(zhuǎn)入受體菌 篩 篩選重組體 重組 DNA技術(shù)操作的主要步驟 載體 質(zhì)粒 噬菌體 病毒 目的基因（外源基因） 基因組 DNA cDNA 人工合成 PCR產(chǎn)物 限制酶消化 開環(huán)載體 DNA 目的基因 連接酶 重組體 轉(zhuǎn)化 體外包裝，轉(zhuǎn)染 帶重組體的宿主 篩選 表型篩選 酶切電泳鑒定 菌落原位雜交 目 錄 目 錄 表達(dá)體系的建立 表達(dá)載體的構(gòu)建 受體細(xì)胞的建立 表達(dá)產(chǎn)物的分離純化 （六）克隆基因的表達(dá) 目 錄 1. 原核表達(dá)體系 （ ） 標(biāo)準(zhǔn)： 選擇標(biāo)志 強(qiáng)啟動(dòng)子 翻譯調(diào)控序列 多接頭克隆位點(diǎn) 不宜表達(dá)真核基因組 DNA 不能加工表達(dá)的真核蛋白質(zhì) 表達(dá)的蛋白質(zhì)常形成不溶性包涵體 (inclusion body) 很難表達(dá)大量可溶性蛋白 大鼠胰島素原 cDNA 的表達(dá)和分泌 目 錄 目 錄 目 錄 優(yōu)點(diǎn)： 可表達(dá)克隆的 cDNA及真核基因組 DNA 可適當(dāng)修飾表達(dá)的蛋白質(zhì) 表達(dá)產(chǎn)物分區(qū)域積累 缺點(diǎn)： 操作技術(shù)難、費(fèi)時(shí)、經(jīng)濟(jì) 轉(zhuǎn)染 —— 將表達(dá)載體導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程 方法： 磷酸鈣轉(zhuǎn)染 DEAE葡聚糖介導(dǎo)轉(zhuǎn)染 電穿孔 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 顯微注射 2. 真核表達(dá)體系 酵母、昆蟲、乳類動(dòng)物細(xì)胞 表達(dá)載體 pFASTBACI 的物理圖譜 目 錄 目 錄 目 錄 （一）疾病基因的發(fā)現(xiàn)與克隆 根據(jù)基因定位克隆之并研究其性質(zhì)，而認(rèn)識(shí)疾病的分子機(jī)制。 三、重組技術(shù)與醫(yī)學(xué)的關(guān)系 （二）生 物制藥 重組 DNA醫(yī)藥產(chǎn)品 產(chǎn) 品 功 能 組織胞漿素原激活劑 抗凝 血液因子 VIII 促進(jìn)凝血 顆粒細(xì)胞 巨噬細(xì)胞集落剌激因子 剌激白細(xì)胞生成 促紅細(xì)胞生成素 剌激白細(xì)胞生成 生長(zhǎng)因子 (bFGF, EGF) 刺激細(xì)胞生長(zhǎng)與分化 生長(zhǎng)素 治療侏儒癥 胰島素 治療糖尿病 干擾素 (? 1b, ?2a, ? 2b, ?) 抗病毒感染及某些腫瘤 白細(xì)胞介素 激活、剌激各類白細(xì)胞 超氧化物歧化酶 抗組織損傷 單克隆抗體 利用其結(jié)合特異性進(jìn)行診斷試驗(yàn)、腫瘤導(dǎo)向治療 乙肝疫苗 (CHO, 酵母 ) 預(yù)防乙肝 口服重組 B亞單位菌體霍亂菌苗 預(yù)防霍亂 目 錄 目 錄 基因診斷 (geic diagnosis)是 利用分子生物學(xué)及分子遺傳的技術(shù)和原理 ， 在 DNA水平分析 、 鑒定遺傳疾病所涉及基因的置換 、 缺失或插入等突變 。 （三）基因診斷 基本過程 區(qū)分或鑒定 DNA的異常 分離、擴(kuò)增待測(cè)的 DNA片斷 目 錄 標(biāo)準(zhǔn) . 能正確擴(kuò)增靶基因； . 能準(zhǔn)確區(qū)分單個(gè)堿基的差別； . 本底或噪聲低，不干擾 DNA的鑒定 。 . 便于完全自動(dòng)化操作，適合大面積、大人群普查。 目 錄 （四）基因治療 定義 基因治療 (gene therapy)是向有功能缺陷的細(xì)胞補(bǔ)充相應(yīng)功能的基因，以糾正或補(bǔ)償其基因的缺陷，從而達(dá)到治療的目的。 方式 體細(xì)胞基因治療 (somatic cell gene therapy) 性細(xì)胞基因治療 (germ line gene therapy) 目 錄 1. 產(chǎn)前診斷 2. 攜帶者測(cè)試 3. 癥候前診斷 4. 遺傳病易感性 （五）遺傳疾病的預(yù)防 目 錄 演講完畢，謝謝觀看！
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