基因工程的酶學基礎(chǔ)-powerpoint演示文稿-資料下載頁
2025-01-07 17:43本頁面
【正文】 的 DNA片斷上原有的核苷酸，因此叫做取代合成。 合成取代法優(yōu)于缺口轉(zhuǎn)移法： 不會出現(xiàn)發(fā)夾結(jié)構(gòu)而缺口轉(zhuǎn)移制備的探針會出現(xiàn)這種結(jié)構(gòu)； 應用適宜的核酸內(nèi)切限制酶切割，便可很容易的變成特定序列的探針。 具 EcoR1位點的 DNA分子 對 DNA分子 3‘端有控制的降解 合成作用產(chǎn)生選擇性標記 T4DNA聚合酶的取代合 成法標記 DNA斷末端及 制備鏈的特異探針 反轉(zhuǎn)錄酶： 具有反轉(zhuǎn)錄酶活性和 RNaseH活性。 主要作用是以 mRNA為模板合成 cDNA；用來對 5’突出末端的 DNA片斷作末端標記。 合成 cDNA的主要步驟： 應用 poly(A)mRNA為模板，以 12~18個堿基長的 oligo(dT)片斷作為引物，加入反轉(zhuǎn)錄酶，合成出 cDNA第一鏈 。 用堿水解法除去 mRNA模板，單鏈 cDNA能自我折疊形成一種發(fā)夾結(jié)構(gòu)，作第二鏈的引物，用反轉(zhuǎn)錄酶或 Klenow聚合酶催化第二鏈 cDNA的合成； 用 SＩ核酸內(nèi)切酶消化除去單鏈區(qū)的發(fā)夾結(jié)構(gòu)。 通過同聚物或合成的銜接物，使 DNA分子克隆到適當?shù)妮d體分子上。 T7DNA聚合酶： 1978年， T7噬菌體的大腸桿菌寄主細胞中純化出來的一種核酸酶。 具有 5’ 3’的聚合酶活性和很高的單鏈及雙鏈的 3’ 5’核酸外切酶活性。 T7DNA聚合酶的用途： 用于對大分子量模板的延伸合成 ； （不受 DNA二級結(jié)構(gòu)的影響，聚合能力較強可 延伸合成數(shù)千個核苷酸） 通過延伸或取代合成法標記 DNA3’末端 將雙鏈 DNA的 5’或 3’突出末端轉(zhuǎn)變成平末 端的結(jié)構(gòu)。 修飾的 T7DNA聚合酶 對天然的 T7DNA聚合酶進行修飾，使之完全失去 3’ 5’的外切酶活性。聚合作用的速率增加了 3倍。 用途： 作為一種 DNA序列分析的工具酶： 加工性能高；無 3’ 5’的外切酶活性； 具有催化脫氧核糖類似物聚合的能力。 制備探針； 可催化較低水平的 dNTP （ μmol/L ）參入。 有效的填補和標記具有 5’突出末端 的 DNA片斷的 3’ 末端。 聚合作用高；失去了 3’ 5’的外切酶活性 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 , January 23, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 11:49:0511:49:0511:491/23/2023 11:49:05 AM 1以我獨沈久，愧君相見頻。 :49:0511:49Jan2323Jan23 1故人江海別，幾度隔山川。 11:49:0511:49:0511:49Monday, January 23, 2023 1乍見翻疑夢，相悲各問年。 :49:0511:49:05January 23, 2023 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 2023年 1月 23日星期一 上午 11時 49分 5秒 11:49: 1比不了得就不比，得不到的就不要。 。 2023年 1月 上午 11時 49分 :49January 23, 2023 1行動出成果，工作出財富。 2023年 1月 23日星期一 11時 49分 5秒 11:49:0523 January 2023 1做前，能夠環(huán)視四周；做時，你只能或者最好沿著以腳為起點的射線向前。 上午 11時 49分 5秒 上午 11時 49分 11:49: 沒有失敗，只有暫時停止成功！。 , January 23, 2023 很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒有。 11:49:0511:49:0511:491/23/2023 11:49:05 AM 1成功就是日復一日那一點點小小努力的積累。 :49:0511:49Jan2323Jan23 1世間成事，不求其絕對圓滿，留一份不足，可得無限完美。 11:49:0511:49:0511:49Monday, January 23, 2023 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 :49:0511:49:05January 23, 2023 1意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 1月 23日星期一 上午 11時 49分 5秒 11:49: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 。 2023年 1月 上午 11時 49分 :49January 23, 2023 1少年十五二十時，步行奪得胡馬騎。 2023年 1月 23日星期一 11時 49分 5秒 11:49:0523 January 2023 1空山新雨后，天氣晚來秋。 上午 11時 49分 5秒 上午 11時 49分 11:49: 楊柳散和風，青山澹吾慮。 , January 23, 2023 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。 11:49:0511:49:0511:491/23/2023 11:49:05 AM 1越是沒有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 :49:0511:49Jan2323Jan23 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯兒。 11:49:0511:49:0511:49Monday, January 23, 2023 1知人者智，自知者明。勝人者有力，自勝者強。 :49:0511:49:05January 23, 2023 1意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 1月 23日星期一 上午 11時 49分 5秒 11:49: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。 2023年 1月 上午 11時 49分 :49January 23, 2023 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 2023年 1月 23日星期一 11時 49分 5秒 11:49:0523 January 2023 1一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。 上午 11時 49分 5秒 上午 11時 49分 11:49: MOMODA POWERPOINT Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blandit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis ut cursus. 感 謝 您 的 下 載 觀 看 專家告訴
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