基因工程操作的工具酶-資料下載頁
2025-01-06 02:22本頁面
【正文】 （ 1） 5’末端標(biāo)記前的處理； （ 2）去除 DNA片段的 5’磷酸基團(tuán)，防止自身連接； 分子量 60000D,在二價陽離子的作用下，催化 dNTP加于 DNA分子的 3’羥基端。 底物： 帶 3’羥基端單鏈 DNA或帶 3’羥基突出端的雙鏈 DNA。 用途： cDNA加同聚尾。 2 .標(biāo)記 DNA3’末端。 S1 S1 核酸酶的基本特性：來自稻谷曲霉菌（ Aspergillus oryzae） 水解單鏈核酸以及雙鏈核酸中的單鏈區(qū)或單鏈末端 ，產(chǎn)生 5’–核苷酸和 5’末端為 p的寡核苷酸 。 Zn2+必需 ,最適 pH范圍為 ,需要 NaCl 10 300 mM. 降解單鏈 DNA的速度比降解雙鏈 DNA快 75000倍。 S1核酸酶 降解單鏈 DNA或 RNA,產(chǎn)生帶 5’磷酸的單核苷酸或寡核苷酸。需要輔助因子 Zn。 用途： (1) 去除 DNA片斷中突出的單鏈尾以產(chǎn)生平端。 (2) 打開雙鏈 cDNA合成中產(chǎn)生的發(fā)夾。 帶切口的雙鏈 DNA S1核酸酶 8 .T4噬菌體多核苷酸激酶 催化 ATP的 γ磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到 DNA或 RNA的 5’末端。 來源于 T4噬菌體感染的大腸桿菌細(xì)胞。已在多種哺乳動物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了多核苷酸激酶。 用途： 1 .標(biāo)記 DNA或 RNA5’末端。 5’磷酸基團(tuán)的 DNA進(jìn)行磷酸化或者合成接頭進(jìn)行磷酸化。 9. DNase Ⅰ 從牛胰中分離到的內(nèi)切酶 ， 水解雙鏈 DNA比單鏈 DNA迅速 ， 隨著反應(yīng)進(jìn)行 ， 雙鏈底物減少 ， 單鏈濃度增加 ， 反應(yīng)自動減速 。 酶反應(yīng)的最適 pH在 7左右 ， Mg2+、 Mn 2+和 Co2+是激活劑 。 A 特異攻擊 RNA上嘧啶殘基的 3’端，切割與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵。 舉例：5’pApGpCpCpGpApApUpGpCpApG3’ 5’pApGpCp＋ ? 5’pApGpCpCpGpApApUpGpCpApG3’ 5’pApGpCp＋ Cp ＋ GpApApUp ＋ GpCp ＋ ApG RNaseU2 RNaseU2的堿基專一性與 RNase A互補(bǔ)，特異水解 RNA鏈中嘌呤核苷酸的 3’磷酸基團(tuán)與相鄰核苷酸的 5’OH之間的鍵，生成以 3’嘌呤核苷酸和以 3’嘌呤核苷酸為末端的寡核苷酸。 T1 一種內(nèi)切核糖核酸酶。特異作用于鳥嘌呤核苷酸3’端磷酸并切斷相連的磷酸二酯鍵。 舉例：5’pApGpGpCpCpGpApApGpUpGpCpApGpC 5’pApGp ＋ Gp ＋ ? 5’pApGpGpCpCpGpApApGpUpGpCpApGpC 5’pApGp ＋ Gp ＋ CpCpGp ＋ ApApGp ＋ UpGp ＋ CpApGp ＋ C 本章小結(jié) 1 工具酶 2 限制性內(nèi)切酶 3 聚合酶 4 連接酶 5 堿性磷酸酶 6 末端轉(zhuǎn)移酶 7 核酸酶 S1 8 T4噬菌體多核苷酸激酶 mRNA,按適當(dāng)順序列出從 mRNA 的 cDNA克隆到表達(dá)載體你所運(yùn)用到的所有酶？ 答案： (1) 逆轉(zhuǎn)錄酶 (2)DNA聚合酶 (3)S1核酸酶 （ 4）限制性內(nèi)切酶 (末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶） (5) DNA連接酶 思考題 1 什么是限制修飾？ 2 在基因工程中應(yīng)用最廣泛的是 型限制性內(nèi)切酶。 3 Eco RⅠ 的識別切割序列是： 。 4 具有相同的識別序列，相同的酶切位點(diǎn)的酶叫 。 5 濃縮的酶液可以用水稀釋。（ ） 6 酶切反應(yīng)的溫度是 37℃ 。（ ） 7 依賴于 RNA的 DNA聚合酶是 。 DNA自身環(huán)化的酶是 。 9 能夠在 DNA分子的 3’羥基端加 dNTP的酶是 。
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1