【正文】 5’ 3’ HO OH 3’ P OH 5’ 3’ HO P 5’ ATP T4多核苷酸激酶 第四節(jié) DNA修飾酶 生命科學學院 三、堿性磷酸酶 1）堿性磷酸酶種類 細菌性堿性磷酸酶 （ Bacterial alkaline phosphatase， BAP），從大腸桿菌中分離出來。具有抗熱性。 小牛腸堿性磷酸酶 （ Calf intestinal alkaline phosphatase， CIAP），從小牛腸中純化出來。加熱 68 ℃ 可完全失活。 2）堿性磷酸酶的特性 催化脫掉 DNA（或 RNA） 5’端的磷酸根 。 3’ HO P 5’ 3’ HO OH 5’ 3’ HO OH 堿性磷酸酶 5’ P OH 3’ 5’ 第四節(jié) DNA修飾酶 生命科學學院 第四節(jié) DNA修飾酶 生命科學學院 3)堿性磷酸酶的功能 防止線性化的載體份子自我連接 其中每條鏈上都有一個 nick，但轉(zhuǎn)入細菌后會被修復。 第四節(jié) DNA修飾酶 生命科學學院 第五節(jié) 外切酶核酸（自學） 核酸外切酶 是一類從多核苷酸鏈的一頭開始催化 降解核苷酸的酶。 一、作用于單鏈的核酸外切酶 如： 大腸桿菌核酸外切酶 I（ exo I）；大腸桿菌核酸外切酶 Ⅶ （ exo Ⅶ ） 二、作用于雙鏈的核酸外切酶 如： 大腸桿菌核酸外切酶 Ⅲ （ exo Ⅲ ）； ?噬菌體核酸外切酶（ ? exo）； T7噬菌體基因 6核酸外切酶 三、既可作用于單鏈又可作用于雙鏈的核酸外切酶 如： Bal 31核酸酶 生命科學學院 DNA外切酶 切割方式 識別位點 單鏈 大腸桿菌核酸外切酶 I（ exo I） 5’?3’ 5’OH 大腸桿菌核酸外切酶 Ⅶ （ exo Ⅶ ） 5’?3’ 3’?5’ 5’P 3’OH 雙鏈 核酸外切酶 Ⅲ （ exo Ⅲ ） 3’?5’ 3’OH ?噬菌體核酸外切酶（ ? exo） 5’?3’ 5’P T7噬菌體基因 6核酸外切酶 5’?3’ 5’P 5’OH 單、雙鏈 Bal 31核酸酶 5’?3’ 3’?5’ 3’OH 不同核酸外切酶的特性比較 第五節(jié) 外切酶核酸 生命科學學院 第五節(jié) 外切酶核酸 生命科學學院 第六節(jié) 單鏈內(nèi)切核酸酶 一、 S1核酸酶 來源： 來源于稻谷曲霉（ Aspergillus oryzae） 功能： 是一種高度單鏈特異的核酸 內(nèi)切酶 。 注意： 對雙鏈 DNA、雙鏈 RNA和 DNARNA雜交體相對不敏感。 酶量大可完全消化雙鏈， 中量，可在切口或小缺口處切割雙鏈 用途： (1)測定核酸分子的雜交程度； (2)去除 DNA片段中突出的單鏈尾巴； (3)打開 cDNA合成時形成的發(fā)夾環(huán)結(jié)構(gòu)。 生命科學學院 一、 S1核酸酶 第六節(jié) 單鏈內(nèi)切核酸酶 生命科學學院 一、 S1核酸酶 第六節(jié) 單鏈內(nèi)切核酸酶 生命科學學院 一、 S1核酸酶 第六節(jié) 單鏈內(nèi)切核酸酶 生命科學學院 第六節(jié) 單鏈內(nèi)切核酸酶 一、 S1核酸酶 S1的用途：合成CDNA時切除單鏈環(huán) 生命科學學院 二、脫氧核糖核酸酶 I 來源于牛胰臟，分子質(zhì)量為 31ku，是一種糖蛋白。 用途： DNA聚合酶 I一起參加切口平移 DNA文庫 DNaseI足跡法測定 DNA結(jié)合蛋白在 DNA上的精確結(jié)合位點 DNA 第六節(jié) 單鏈內(nèi)切核酸酶 生命科學學院 第七節(jié) RNA酶 一、核糖核酸酶 A 來源于牛胰臟，是一種內(nèi)切核糖核酸酶?？商禺惖毓?RNA上 嘧啶殘基的 3‘端 ，切割與相鄰核苷酸形成的 磷酸二酯鍵 。反應終產(chǎn)物是嘧啶 3’磷酸及末端帶嘧啶 3‘磷酸的寡核苷酸。 用途： （ 1）從 DNARNA或 RNARNA雜合體中去除未雜合的 RNA區(qū) （ 2）確定 DNA或 RNA中單堿基突變的位置 （ 3） RNA檢測 （ 4）降解 DNA制備物中的 RNA分子 生命科學學院 二、核糖核酸酶 H 核糖核酸酶 H(RNaseH)催化 DNARNA雜合體的 RNA部分的核內(nèi)降解，產(chǎn)生不同鏈長帶 3‘羥基和 5’磷酸末端的寡核糖核酸。 第七節(jié) RNA酶 用途： 在 cDNA克隆，合成第二鏈之前去除 RNA 。 生命科學學院 小 結(jié) 酶切位點的確定 line DNA W=N+1 ccc DNA W=N 生命科學學院 習 題 1. 片段大小 2450 line DNA W=N+1 ccc DNA W=N 2. 兩單酶切成三個片段 ,說明各有兩個切點 p p 750 500 1200 3 .Pst1, 1200, 750不見 , 說明 : (1) 另外兩個酶的切點在其中 xppx Xbo1 500 (2) 兩個 Pst1酶的切點相距 500 500 1200 4. 1200300+900(被 Xbo1) xpp x 300 900 Pst1距 Xbo1為 300 750 5. 750— 150+600 xppx 150 600 Pst1距 Xbo1為 600 1400 6. 1400— 600+500+300 xppx 600 500 300 2450 7. 2450150+600+500+300+900 x p px 150 600 500 300 900 生命科學學院 酶切位點的確定 line DNA W=N+1 ccc DNA W=N 生命科學學院