基因與基因工程ppt課件-資料下載頁
2025-09-11 18:24本頁面
【正文】 ＋ GAATCGG 339。 339。0HA C G T CTTAGCC 5‘ （ 4） 同裂酶、同尾酶和異裂酶 a. 同裂酶（ Isoschizomers) 具有同樣的識(shí)別位點(diǎn)，產(chǎn)生同樣的粘性末端，但是從不同的細(xì)分 離出來的，因而具有不同名稱的一類核酸內(nèi)切限制酶。 例如 HpaⅡ 和 MspⅠ 就是一對(duì)具有同樣識(shí)別序列：的同裂 同裂酶形成同樣的粘性末端，重組后識(shí)別序列不變！ b. 同尾酶 （ Isocaudamers） 一組來源不同、識(shí)別序列各異，但能夠切割形成相同粘性末端的核 酸內(nèi)切限制酶。例如 BanHⅠ 、 BaglⅡ 和 Sau3A，即是組同尾酶， （ 5） DNA連接酶 （ 1）連接酶 ―― 能夠利用 ATP分子中 γ磷酸集團(tuán)的能量，通過催化兩條并排的 DNA鏈的 5’P集團(tuán)和 3’OH集團(tuán)之間形成一個(gè)磷酸二酯鍵，而使兩個(gè) DNA片段共價(jià)連接起來的核酸酶。 （ 2）連接條件： a. 被連接的兩條 DNA片段，一條鏈的 3’末端具有一個(gè)游離的 OH集團(tuán)；另一條的 5’末端存在一個(gè)磷酸集團(tuán)（ P）。 b. 在 OH和 P集團(tuán)之間形成磷酸二酯鍵是一種需要能量的過程（ ATP）。 c. 最佳連接溫度： 4～ 16℃ 。 4. 基因克隆的載體 （ 1） 基因克隆載體的類型： （ a） 質(zhì)粒載體； （ b） 柯斯質(zhì)粒載體； （ c） λ噬菌體載體； （ d） 單鏈?zhǔn)删w載體； （ e） 噬菌粒載體； （ f） 酵母人工染色體載體 （ g） YAC后載體 （ 2） 質(zhì)粒載體 （ a） 質(zhì)粒（ Plasmid）的定義 一般指一類獨(dú)立于細(xì)菌染色體 DNA（染色體外）的自主 復(fù)制的共價(jià)、閉合、環(huán)形雙鏈的 DNA分子。 （ b）質(zhì)粒的一般特性 共價(jià)、閉合、環(huán)形雙鏈的 DNA分子（ covalently closed circuler DNA,cccDNA） 除了酵母殺傷質(zhì)粒 RNA外，所有的質(zhì)粒都是 DNA。 質(zhì)粒 DNA的復(fù)制必須依賴于寄主細(xì)胞提供核酸酶 及其他蛋白質(zhì)分子。 （ 3） 質(zhì)粒 DNA的分子構(gòu)型 a. sc構(gòu)型 …… 即 cccDNA所呈現(xiàn)的超螺旋構(gòu)型， 走在凝膠的最前面； b. OC構(gòu)型 …… 即開環(huán) DNA（ OC DNA）的構(gòu)型，其中一條 DNA鏈保持完整的環(huán)形結(jié)構(gòu)，另一條鏈則出現(xiàn)一至數(shù)個(gè)缺口，走在凝膠的最后面； c. L構(gòu)型 …… 發(fā)生雙鏈斷裂形成的線性 DNA的構(gòu)型。通稱 L型，走在凝膠的中間部位。 （ 4）質(zhì)粒載體必須具備的條件 a. 一般具有 l個(gè)復(fù)制區(qū)或復(fù)制因子； l到 2個(gè)抗生素抗性基因（供選擇重組子）； （供外源 DNA片段的插入）； （質(zhì)粒載體的克隆能力約 56kb）。 5. DNA分子的體外重組 （ 1） 粘性末端連接法 ：用同樣的核酸內(nèi)切限制酶 ，例如 EcoR I， 分別切割外源克隆的 DNA和載體DNA， 兩者就會(huì)形成具有相同的互補(bǔ)的粘性末端 ， 因 此 可 榮 譽(yù) 地 用DNA連接酶將它們連接起來 。 (a) 將硝酸纖維素濾膜鋪放在生長著轉(zhuǎn)化菌落的平板表面，使其中的質(zhì)粒 DNA轉(zhuǎn)移到濾膜上； (b) 取出濾膜，作溶菌、堿變性、酸中和等處理后，置 80℃ 下烤干； (c) 帶有 DNA印跡的濾膜同 32P標(biāo)記的適當(dāng)探針雜交，以檢測(cè)帶有重組質(zhì)粒（含有被研究的 DNA插入片段 )的陽性菌落； (d) 將放射自顯影的 X光底片同保留下來的原菌落平板對(duì)照，從中挑出陽性菌落，供進(jìn)一步的分析研究。 7. 表達(dá)載體的結(jié)構(gòu) ( 大腸桿菌表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)成分 ) …… 參與控制真核基因轉(zhuǎn)錄與轉(zhuǎn)譯 的遺傳元件。 b. 標(biāo)記基因 …… 抗菌素抗性基因。供選擇轉(zhuǎn)化子 用。 …… 供外源基因的插入構(gòu)建重組體 分子。 …… 包括轉(zhuǎn)錄終止子和轉(zhuǎn)譯終止子。 8. 克隆的真核基因在大腸桿菌中表達(dá) cDNA序列； 序列取向的條件下，克隆在大腸桿菌表達(dá)載體的適當(dāng)?shù)奈稽c(diǎn)上； ，從而能夠在大腸桿菌細(xì)胞中正確地轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯，并表達(dá)出所克隆的真核目的基因的蛋白質(zhì)。 9. 基因工程的應(yīng)用 （ 1）植物基因工程在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用： 的產(chǎn)量； 農(nóng)作的品質(zhì)； 。 （ 2）基因工程在工業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用： ；； ； 的開發(fā)。 （ 3）在醫(yī)學(xué)衛(wèi)生上的應(yīng)用： ； 病的基因治療； ； 斷與治療； d. 新疫苗的開發(fā)利用； 利用。 （ 4）基因工程在環(huán)境衛(wèi)生上的應(yīng)用： 質(zhì)； 。 （ 5）基因工程在防空軍事上的應(yīng)用： 基因高級(jí)材料研發(fā)和利用。 謝謝大家 再見！
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