基因工程finalppt課件-資料下載頁
2025-09-11 18:26本頁面
【正文】 出信使RNA核苷酸順序，再據(jù)此推算出基因DNA的脫氧核苷酸順序。用游離脫氧核苷酸直接合成相應的基因。 DNA合成儀 PCR擴增儀 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ * * * * * * * * * * * * * * * * * * 磷酸化 磷酸化 磷酸化 退火 連接 退火 連接 退火 連接 粘性末端 粘性末端 合成的全基因 DNA 目的基因化學合成全片段酶促法連接示意圖 目的基因與運載體結合 形成重組 DNA 提取質粒并用限制酶切割 用 連接酶將目的基因和質粒連接 用限制酶切割目的基因和用 相同的限制酶 切割質粒使之出現(xiàn)一個切口，將目的基因插入切口處，讓目的基因的 黏性末端 與切口上的 黏性末端 互補配對后，在 DNA連接酶的作用下連接形成 重組 DNA分子 ? 基因工程中常用的受體細胞有大腸桿菌、枯草桿菌、酵母菌和 動植物細胞 等。如用質粒作運載體 ,則選大腸桿菌為受體細胞 ? 目的基因可以隨著受體細胞進行快速的繁殖，在很短的時間內(nèi)獲得大量的基因。 將目的基因導入受體細胞 將受體細胞進行擴增 將重組 DNA導入受體細胞并擴增 將重組 DNA導入受體細胞并擴增 將目的基因導入受體細胞 將受體細胞進行擴增 轉化 ： 外源裸露 DNA進入受體細胞，并在受體細胞內(nèi)穩(wěn)定維持和表達的過程稱為轉化。 轉染 ： 如果外源 DNA分子是病毒或者噬菌體DNA或 RTDNA，那么把此過程也稱為轉染。 化合物誘導轉化 ：感受態(tài)細胞 電穿孔轉化 ：高電壓脈沖產(chǎn)生瞬間通道 超聲波處理轉化 ：擊穿細胞膜形成膜通道 脂質體介導轉化 ：磷質雙層包裹 DNA 磷酸鈣轉染法 ：動物細胞捕獲 DNA磷酸鈣沉淀物 常用轉化法 篩選含有目的基因的受體細胞 前三步的處理十分繁鎖，為保證目的基因得到有效利用，通常用大量的受體細胞來接受不多的目的基因。這樣，處理的受體細胞中真正攝入了目的基因的很少，必須將它從中檢測出來 。 受體細胞是否具 運載體特有的 “ 標記基因 ” 所控制的性狀 檢測依據(jù) 根據(jù)載體抗性基因和相應的藥物篩選轉化子 卡那霉素抗性基因（ cat或 cmr） 卡那霉素 四環(huán)素抗性基因（ knr或 kanr） 四環(huán)素 根據(jù)報告基因篩選轉化子 螢火蟲熒光素酶報告基因（ luc） 綠色熒光蛋白基因（ gfp） 根據(jù)噬菌斑篩選轉化子 重組子的鑒定 根據(jù)重組 DNA分子特征鑒定 ? 根據(jù)重組 DNA分子大小 ? 酶切圖譜 ? PCR擴增片段鑒定 ? DNA雜交法鑒定： Southern 雜交，斑點印跡雜交， 菌落（噬菌體）原位雜交 ? 應用 DNA芯片鑒定 ? 根據(jù) DNA核苷酸序列鑒定 DNA = 瓊脂糖電泳 = 印跡轉移 = 預雜交 = 雜交（變性探針） = 洗膜 = 放射自顯影或顯色 重組子的鑒定 根據(jù)目的基因轉錄產(chǎn)物（ mRNA）鑒定 Northern 雜交：用 DNA探針檢測 RNA分子 mRNA提取 = 甲醛變性電泳 = 印跡轉移 = 預雜交 = 雜交（變性探針） = 洗膜 = 放射自顯影或化學發(fā)光 根據(jù)目的基因翻譯產(chǎn)物（蛋白質、酶、多肽）鑒定 重組子的鑒定 凝膠電泳檢測 生化反應檢測 免疫學檢測 生物學活性檢測 ? 酶聯(lián)免疫吸附（ ELISA） ? Westhern印跡法 ? 免疫沉淀測定 目的基因 基因載體 重組體 分 切 接 轉 篩 總體技術路線 基因工程的應用 基因工程藥物 : 干擾素、生長因子、腫瘤壞死因子、促紅細胞生成素 新型疫苗 : 口服轉基因疫苗 DNA治療 : 腫瘤、血友病、地中海貧血、艾滋病、心血管疾病 轉基因植物 : 抗病、抗蟲、抗旱、改變花色、表達藥用蛋白 轉基因動物 : 生長、肉質、抗病、生物反應器 第一次測驗題目 ： 簡述基因工程研究的基本技術路線
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