基因工程原理ppt課件-資料下載頁
2025-09-11 18:25本頁面
【正文】 質粒 DNA 每 μg DNA轉化子 四環(huán)素 卡那霉素 氯霉素 pSC101(未切割 ) 3 105 (EcoRⅠ 切割 ) 104 R65(未切割 ) 104 104 R65 (EcoRⅠ 切割 ) ＜ 5 1 102 4 101 34 ◆ 他們從用 EcoRⅠ 處理的 R65的卡那霉素抗性平板上選擇了一個克隆 ， 并檢查了它的抗性 ， 發(fā)現(xiàn)該克隆同時具有磺胺的抗性 ，但沒有氯霉素 、 四環(huán)素的抗性 。 然后從該克隆中分離了一個環(huán)狀質粒 DNA， 命名為pSC102， 分子量大約為 17 106。 35 ◆ 接著用 EcoRⅠ 分別切割 pSC102 和 R65質粒DNA， 進行電泳檢查 ， 發(fā)現(xiàn) pSC102被切成三個片段 ， 相對于質粒 R65的 EcoRⅠ 酶切片段 Ⅲ 、Ⅴ 和 Ⅷ 。 ◆ 這些結果說明不同的酶切片段轉化大腸桿菌后能夠在細胞內(nèi)進行重組連接形成有功能的重組質粒 。 這一結果也提示 ， 如果能夠在體外重組成功 ， 并能將重組體引入細胞內(nèi) ， 同樣具有生物學功能 。 36 ? pSC105， 體外構建的重組體 ◆ 作者為了獲得體外構建的重組體 ， 分別用 EcoRⅠ 切 割 質 粒 pSC101 和pSC102,然后加入 DNA連接酶進行連接后轉化大腸桿菌 ， 在四環(huán)素和卡那霉素雙抗性的平板上檢查重組情況 ， 同時設計一些合理的對照實驗 。 37 質粒 DNA 抗生素抗性的轉化頻率 四環(huán)素 卡那霉素 四環(huán)素＋卡那霉素 未用酶處理 2 105 1 105 2 102 EcoRⅠ 處理 104 103 7 101 EcoRⅠ + DNA連接酶 104 103 102 表：質粒 pSC101 和 pSC102混合 DNA的 大腸桿菌 C600的轉化 38 ?pSC101與 RSF1010的共整合 : pSC109的構建 ◆ 象 pSC101一樣 ， 質粒 RSF1010上也只有一個 EcoRⅠ切點 ， 所以只要用 EcoRⅠ 分別處理質粒 RSF1010和pSC101， 然后用 DNA連接酶將兩個線性 DNA連接起來轉化大腸桿菌 ， 得到一個具有三種抗性的重組質粒 ∶ 四環(huán)素抗性 、 鏈霉素抗性 、 磺胺抗性 。 ◆ 這種重組說明兩個復制子能夠重組 ， 并能在細胞內(nèi)表達 。 39 基因操作 的基本過程和特點 ?基因操作的基本過程 涉及的過程可用分 /合成 、切 、 連 、 轉 、 選 、 鑒六個字表示 。 40 外源基因的克隆與表達 41 基因工程的技術組合 42 ?基因工程的特點 ◆ 基因工程有兩個基本的特點 ∶ 分子水平上的操作和細胞水平上的表達 。 ◆ 基因工程技術的誕生使人們能夠在試管里進行分子水平上的操作 ， 象一項工程那樣 ， 進行按圖施工的操作 ， 構建在生物體內(nèi)難以進行的重組體 ， 然后將重組的遺傳物質引入相應的宿主細胞 ， 讓其在宿主細胞中進行工作 。 ◆ 這實際上是進行無性繁殖 ， 即克隆 ， 所以基因工程通常又稱為基因克隆 。 43 基因工程的基礎與應用
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