三、基因工程的基本條件-工具酶和細(xì)胞-資料下載頁(yè)
2025-01-21 22:06本頁(yè)面
【正文】 300 mM 降解單鏈 DNA的速度比降解雙鏈 DNA快 75000倍 降解單鏈 DNA的速度比降解單鏈 RNA快 7倍 核酸酶 單鏈核酸內(nèi)切酶： S1核酸酶 S1核酸酶的基本反應(yīng)： 內(nèi)切單鏈 DNA或 RNA 5‘ … GCTCAGCTCTTGAGGAGT… 3’ S1 Zn2+ 5‘ … GCTCAGCTC TTGAGGAGT… 3’ 5‘ … GCTC AGCTC TTGAG GAGT… 3’ 5‘ dNMPs 或 5‘ NMPs 核酸酶 單鏈核酸內(nèi)切酶： S1核酸酶 S1核酸酶的基本反應(yīng)： 內(nèi)切帶缺口或缺刻的雙鏈 DNA或 RNA 5‘ … GCTCAG CTGGAGT… 3’ 3‘ … CGAGTCGACCTCA… 5‘ 5‘ … GCTCAGCTGGAGT… 3’ 3‘ … CGAGTC ACCTCA… 5‘ nick gap S1 Zn2+ 5‘ … GCTCAG 3‘ … CGAGTC TGGAGT… 3’ ACCTCA… 5‘ 核酸酶 單鏈內(nèi)切雙鏈外切的核酸酶： Bal31核酸酶 基本特性：來(lái)自艾氏交替單胞菌（ ） Ca2+ 5‘ dNMPs 或 5‘ NMPs ssDNA or RNA Ca2+ Ca2+ 核酸酶 單鏈內(nèi)切雙鏈外切的核酸酶： Bal31核酸酶 Bal31核酸酶的基本用途：誘發(fā) DNA突變 EcoRI A B C EcoRI EcoRI B C A Bal31 B C A 環(huán)化 A C 核酸修飾酶 末端脫氧核苷酰轉(zhuǎn)移酶（ TdT） TdT的基本特性：來(lái)自小牛胸腺 ,催化 DNA在其 3’OH末端加 NTP 不需要模板的 DNA聚合酶， 隨機(jī)摻入 dNTPs 5‘ p 3‘ HO OH 3‘ p 5‘ TdT Mg2+ dATP 5‘ p 3‘ HO AAAAAAAAAAAA OH 3‘ p 5‘ TdT的基本特性： 5‘ p 3‘ HO OH 3‘ p 5‘ TdT Co2+ dATP 5‘ p 3‘ HO AAAAAAAAAAA AAAAAAAAAA OH 3‘ p 5‘ 5‘ p 3‘ HO OH 3‘ p 5‘ TdT Co2+ dATP 5‘ p 3‘ HO AAAAAAAAAAAAAA OH 3‘ p 5‘ AAAAAAAAAAA 核酸修飾酶 堿性磷酸單酯酶 來(lái)自小牛胸腺的堿性磷酸單酯酶（ CIP） 來(lái)自大腸桿菌的堿性磷酸單酯酶（ BAP） 5‘ p OH 3‘ DNA or RNA 5‘ ppp dN 5‘ pppN BAP / CIP OH 3‘ 5‘ HO 5‘ HO dN 5‘ HO N 核酸修飾酶 T4多核苷酸磷酸激酶（ T4PNP） T4PNP的基本特性：在 DNA、 RNA的 5‘ OH上加磷酸 5‘ HO 3‘ HO OH 3‘ OH 5‘ T4PNP Mg2+ pppATP（ g32PATP） 5‘ p 3‘ HO OH 3‘ p 5‘ 用于探針的末端同位素標(biāo)記： C 用于基因轉(zhuǎn)移的受體菌或細(xì)胞 3 基因工程的基本條件 各種基因工程受體的特性 實(shí)驗(yàn)室常用的基因工程受體 受體細(xì)胞應(yīng)具備的條件 受體細(xì)胞應(yīng)具備的條件 限制性缺陷型 外切酶和內(nèi)切酶活性缺陷 重組整合缺陷型 用于基因擴(kuò)增或高效表達(dá)的受體細(xì)胞 具有較高的轉(zhuǎn)化效率 具有與載體選擇標(biāo)記互補(bǔ)的表型 感染寄生缺陷型 防止重組細(xì)菌擴(kuò)散污染，生物武器除外 各種基因工程受體的特性 (原核生物細(xì)胞 ) ?大腸桿菌 遺傳背景清楚，載體受體系統(tǒng)完備，生長(zhǎng)迅速，培養(yǎng)簡(jiǎn)單，重組子穩(wěn)定。 適用于外源 DNA的擴(kuò)增和克隆、原核生物基因的高效表達(dá)、基因文庫(kù)的構(gòu)建，是 DNA重組實(shí)驗(yàn)和基因工程的主要受體菌。 產(chǎn)結(jié)構(gòu)復(fù)雜、種類(lèi)繁多的內(nèi)毒素。 ?枯草桿菌 遺傳背景清楚，蛋白質(zhì)分泌機(jī)制健全 ，生長(zhǎng)迅速，培養(yǎng)簡(jiǎn)單，不產(chǎn)內(nèi)毒素。 適用于原核生物基因的克隆、表達(dá)以及重組蛋白多肽的有效分泌。 遺傳欠穩(wěn)定，載體受體系統(tǒng)欠完備。 ?鏈霉菌 抗生素的主要生產(chǎn)者，操作簡(jiǎn)便，不產(chǎn)內(nèi)毒素。 主要用于抗生素生產(chǎn)菌株的改良。 遺傳不穩(wěn)定，生長(zhǎng)相對(duì)緩慢。 各種基因工程受體的特性 ?酵母菌 具有真核生物的特征，遺傳背景清楚，生長(zhǎng)迅速，培養(yǎng)簡(jiǎn)單，外源基因表達(dá)系統(tǒng)完善，遺傳穩(wěn)定。 適用于外源 DNA的擴(kuò)增、克隆以及真核生物基因的高效表達(dá)、基因文庫(kù)的構(gòu)建、真核生物基因表達(dá)調(diào)控的研究，是DNA重組實(shí)驗(yàn)和基因工程重要的真核受體菌。 內(nèi)源性蛋白產(chǎn)物種類(lèi)繁多且含量高。 （真菌） 各種基因工程受體的特性 ?昆蟲(chóng)細(xì)胞（家蠶） 具有真核生物的特征，外源基因表達(dá)量高，繁殖相對(duì)較快，培養(yǎng)成本低廉，遺傳穩(wěn)定。 適用于真核生物基因的高效表達(dá)。 DNA重組操作系統(tǒng)欠完善。 （動(dòng)物細(xì)胞） ?哺乳動(dòng)物細(xì)胞（中國(guó) 倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 CHO） 與人的親緣關(guān)系近，分子重組表達(dá)系統(tǒng)健全，具有合適的糖基化修飾系統(tǒng)。 適用于哺乳類(lèi)動(dòng)物和人的基因表達(dá)調(diào)控研究、基因藥物的生產(chǎn)，是 DNA重組實(shí)驗(yàn)和基因工程的主要哺乳動(dòng)物受體。 細(xì)胞培養(yǎng)條件苛刻，生長(zhǎng)緩慢。 各種基因工程受體的特性 ?植物細(xì)胞（擬南芥菜、煙葉 ） 農(nóng)作物的經(jīng)濟(jì)意義重大，轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞易于分化，細(xì)胞培養(yǎng)簡(jiǎn)單且成本低廉，具有光合作用。 適用于高等植物基因表達(dá)調(diào)控的研究、基因藥物的生產(chǎn)，農(nóng)作物品質(zhì)的改良。 遺傳操作繁瑣 。 （植物細(xì)胞） 實(shí)驗(yàn)室常用的基因工程受體 大腸桿菌 用于接受質(zhì)粒： C600、 W31 HB10 JM8 JM101（ Aps、 Tcs、 Cms） 用于接受 lDNA： LE39 ED8654 酵母菌 哺乳動(dòng)物細(xì)胞 CHO 畢赤酵母 啤酒酵母
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1