基因工程工具酶簡化版-資料下載頁
2025-05-26 06:03本頁面
【正文】 因組 DNA片段連接并以此為 DNA模板，合成系列 3`— 末端隨機變化數(shù)個堿基且與人工接頭序列相互補的 PCR引物，來進(jìn)行 PCR特異條帶擴增，經(jīng)電泳檢測后可獲得 DNA指紋圖譜 。 此項技術(shù)優(yōu)點 （ 1）穩(wěn)定，重復(fù)性好； （ 2）需用的 DNA量少，適用于分析的 DNA大小范圍寬； （ 3）能產(chǎn)生更多的多態(tài)性標(biāo)志，得到的條帶也更密集，一般比 RFLP和 RAPD多 10～ 100倍，便于比較分析； （ 4）操作易于標(biāo)準(zhǔn)化和自動化，適于大批量的樣品分析。 第七節(jié) 基因工程的其它酶類 一、 DNA及 RNA的修飾酶 （一）未端（脫氧核苷酸）轉(zhuǎn)移酶 （二）堿性磷酸酶 (alkaline phosphatase） （三）多核苷酸激酶 (polynucleotide kinase) 二、單鏈核酸內(nèi)切酶 （ 一 ） S1核酸酶 （ 二 ） Bal 31核酸酶 核酸外切酶 底物 切割位點 大腸桿菌核酸外切酶 Ⅰ ssDNA 5’— OH末端 大腸桿菌核酸外切酶 Ⅲ dsDNA 3’ — OH末端 大腸桿菌核酸外切酶 Ⅴ DNA 3’ — OH末端 大腸桿菌核酸外切酶 Ⅶ ssDNA 3’末端， 5’ P末端 λ噬菌體 λ核酸外切酶 dsDNA 5’ P末端 T7噬菌體核酸外切酶 dsDNA 5’ P末端 三、核酸外切酶 (exonucleases) 本章復(fù)習(xí)要點 ? 限制性內(nèi)切酶 三種類型酶及各自特征； II型酶的相關(guān)概念；酶切位點的估算；酶切反應(yīng)。 ? DNA聚合酶 DNA聚合酶 I、 Klenow酶、 T4DNA聚合酶、 T7DNA聚合酶、反轉(zhuǎn)錄酶及 Taq酶各自的作用特點及用途； PCR的作用原理及幾種延伸技術(shù)。 ? DNA連接酶 T4DNA連接酶的作用特點；銜接體、人工接頭及同聚物加尾三種技術(shù)的原理； AFLP技術(shù)的原理。 ? 其它工具酶 末端轉(zhuǎn)移酶、磷酸酶及 T4多聚核苷酸激酶的特點及用途。
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