基因工程工具酶簡(jiǎn)化版(參考版)
2025-05-29 06:03本頁(yè)面
【正文】 ? 其它工具酶 末端轉(zhuǎn)移酶、磷酸酶及 T4多聚核苷酸激酶的特點(diǎn)及用途。 ? DNA聚合酶 DNA聚合酶 I、 Klenow酶、 T4DNA聚合酶、 T7DNA聚合酶、反轉(zhuǎn)錄酶及 Taq酶各自的作用特點(diǎn)及用途； PCR的作用原理及幾種延伸技術(shù)。 此項(xiàng)技術(shù)優(yōu)點(diǎn) （ 1）穩(wěn)定，重復(fù)性好； （ 2）需用的 DNA量少，適用于分析的 DNA大小范圍寬； （ 3）能產(chǎn)生更多的多態(tài)性標(biāo)志，得到的條帶也更密集，一般比 RFLP和 RAPD多 10～ 100倍，便于比較分析； （ 4）操作易于標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化，適于大批量的樣品分析。 ? 該方法結(jié)合了 RFLP(restriction fragment length polymorphisms)技術(shù)和 RAPD技術(shù)的特點(diǎn) 。 ? T4 RNA連接酶：可催化兩個(gè)單鏈 DNA或 RNA分子的連接。 ? T4 DNA連接酶：可連接 DNA鏈（平粘端均可），也可連 RNA鏈，應(yīng)用廣泛。具有 特異性強(qiáng)、靈敏度高、簡(jiǎn)便快速、對(duì)標(biāo)本的純度要求低等特點(diǎn)。 2） 用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （ PCR） ， 對(duì) DNA片段進(jìn)行體外擴(kuò)增 。 無(wú) 3’ → 5’ 外切核酸酶活性 ， 糾錯(cuò)功能較差 。 六、 Taq DNA聚合酶 具有 5’ → 3’ 外切核酸酶活性 。 主要用途 1） 用于拷貝長(zhǎng)段模板的引物延伸反應(yīng) 。 2） 對(duì)帶有 3’ 突出端的 DNA分子進(jìn)行末端標(biāo)記 。 它的外切核酸酶活性比 kenow片段要強(qiáng) 200倍 。 （ 1）以 DNA聚合酶 I為代表的“合成型” （ 2）以 klenow聚合酶為代表，只有聚合酶活性和部分外切酶的活性 （ 3）逆轉(zhuǎn)錄酶類(lèi)，以 RNA作為聚合模板 根據(jù)模板和作用方式的不同分為三類(lèi)： 二、大腸桿菌 DNA聚合酶 I（ 全酶） 性質(zhì) : ① 5’ → 3’ DNA聚合酶活性 ② 3’ → 5’ 外切核酸酶活性 ③ 5’ → 3’ 外切核酸酶活性 三、大腸桿菌 DNA聚合酶 I大片段 （ Klenow片段） 性質(zhì) 它具有 5’ → 3’ 聚合活性和 3’ → 5’ 外切酶活性 ,失去了 5‘ → 3‘ 的核酸外切酶活性 . 四、 T4噬菌體 DNA聚合酶 性質(zhì) 具有 5’ → 3’ 聚合酶活性及 3’
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