基因工程酶ppt課件(參考版)
2025-01-08 09:17本頁(yè)面
【正文】 用途 :破碎細(xì)胞 。 ：在研究哺乳動(dòng)物 m5CG 、植物 m5CG 和 m5CNG 、腸道細(xì)胞 Gm6ATC 的甲基化水平和分布時(shí)，可利用限制酶對(duì)甲基化的敏感性差異，進(jìn)行分析 50 九、其它酶 1. 蛋白酶 K （ Proteinase K） 是具有高活性的絲氨酸蛋白酶，可以水解范圍廣泛的肽鍵，尤其適合水解羧基末端至芳香族氨基酸和中性氨基酸之間的肽鍵。 49 ： HincⅡ 可識(shí)別四個(gè)位點(diǎn)（ GTCGAC、 GTCAAC、 GTTGAC 和 GTTAAC），甲基化酶 Ⅰ 處理 DNA 后，將 TCGA 中的 A甲基化 ，所以 GTCGAC 將不受 HincⅡ 切割。 4. SssⅠ 甲基化酶 來(lái)自原核生物 Spiroplasma ，可使 CG 序列中的 C 在 C5 位置上甲基化。 2. Dcm 甲基化酶 識(shí)別 CCAGG 或 CCTGG 序列，在第二個(gè)胞嘧啶 C 的 C5 位置上引入甲基 。 許多核酸酶兼有內(nèi)切和外切活性 44 內(nèi)切核糖核酸酶 ,專用 降解 RNA 為 DNA內(nèi)切核酸酶 ,水解單鏈或雙鏈 用途 :(1)缺口平移標(biāo)記探針時(shí)產(chǎn)生隨機(jī)切口 (2)降解 DNA 45 3. S1核酸酶 作用 :降解單鏈 DNA或 RNA(酶量小 ) 降解雙鏈 DNA(酶量大 ) 用途 :(1)去除 DNA突出端 ,切為平頭 (2)切除 cDNA發(fā)夾結(jié)構(gòu) III(ExoIII) 作用 :從雙鏈 DNA3’OH 逐一降解單核苷酸 不降解單鏈 DNA或 3’突出的雙鏈 DNA 用途 :系列缺失亞克隆 46 核酸酶的分類 內(nèi)切酶 ── 非專一性 ── 外切酶 ─ 3＇ 核酸酶 核酸酶 ─ 內(nèi)切酶 ─ ─ 5＇ 核酸酶 ── RNA─ 外切酶 ─ 專一性 ─ ─非限制性 ── 內(nèi)切酶 ─ ─限制性 ── DNA─ ── 外切酶 47 八、 甲基化酶（ Methylase） 1. Dam 甲基化酶 在 GATC 序列中的腺嘌呤 N6 位置上引入甲基 。 端）前除 DNA 或 RNA 539。 41 六、堿性磷酸酶 去除核酸末端磷酸基團(tuán)的酶 . 包括 : 細(xì)菌堿性磷酸酶 (BAP) 牛小腸堿性磷酸酶 (CIP) 蝦堿性磷酸酶 (SAP) 主要用途 : 去除 DNA、 RNA的 5?磷酸根，防止片段自身連接 。 40 T4多聚核苷酸激酶： 催化 ATP的 ?磷酸基到 DNA或 RNA的 5’ OH 主要用途 : 對(duì)缺乏 5‘磷酸的 DNA 或合成接頭進(jìn)行磷酸化 。 39 3. T4 RNA Ligase 由噬菌體編碼 催化單鏈 DNA或 RNA連接。 37 1. T4 DNA Ligase 一條多肽鏈 (Mr=68000)，還可作用于 RNA,但效率低得多 ,需 ATP作輔因子 反應(yīng)條件： 1）溫度 粘端 4℃ ，平端 25℃ 2） 3）陽(yáng)離子 Mg2+ 4）輔因子 ATP 38 2. DNA Ligase Mr=74000, NAD+可促進(jìn)該催化反應(yīng) 分子克隆使用不多，亦不能連接 RNA。 3. T4 噬菌體 DNA聚合酶 活性：
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