基因工程ppt課件(參考版)
2024-09-22 18:26本頁面
【正文】 在不同的表達(dá)系統(tǒng)中，其表達(dá)方式不盡相同。 58 基因工程的主要目的之一，就是要制備大量有用的蛋白質(zhì)和多肽，尤其是人體蛋白。 ? 如果一個(gè)哺乳動(dòng)物的基因組是 3 109堿基對，直接從細(xì)胞中提取并分離出某一特定基因的 DNA片段在技術(shù)上是很困難的。這種重組子的篩選，又稱為 藍(lán)白斑篩選 。 53 由 α互補(bǔ)而產(chǎn)生的 LacZ+細(xì)菌在誘導(dǎo)劑 IPTG的作用下，在生色底物 XGal存在時(shí)產(chǎn)生 藍(lán)色菌落 ，因而易于識(shí)別。 因此，宿主和質(zhì)粒編碼的片段雖都沒有酶活性，但它們同時(shí)存在時(shí)，可形成具有酶學(xué)活性的蛋白質(zhì)。在這個(gè)編碼區(qū)中插入了一個(gè)多克隆位點(diǎn)（ MCS），它并不破壞讀碼框（ ORF），可使少數(shù)幾個(gè)氨基酸插入到 β半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能。 ? 增殖轉(zhuǎn)化細(xì)胞，使得有足夠數(shù)量的轉(zhuǎn)化細(xì)胞用于篩選程序。 47 5. 重組 DNA分子的轉(zhuǎn)化 ? 轉(zhuǎn)化 是指將質(zhì)粒或其他外源 DNA導(dǎo)入處于 感受態(tài)的 宿主細(xì)胞，并使其獲得新的表型的過程。 39 質(zhì)粒載體 ? ori 復(fù)制起點(diǎn) ? MCS 多克隆位點(diǎn) ? Ampr 氨芐青霉素抗性基因 ? LacZ’ β半乳糖苷酶基因的部分序列 ? P 啟動(dòng)子 Ampr lacZ’ MCS PT7 ori PSP6 pGEM3z 40 PGEMT載體圖譜 41 4. DNA的 體外重組 42 EcoRⅠ 5‘ … … 3’ 3‘ … … 5’ ? 回文序列 palindromic seq 限制性核酸內(nèi)切酶 43 Sma I CCCGGG GGGCCC CCC GGG GGG CCC ? 粘性末端 cohensive end ? 平末端 blunt end 44 常見的限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn) 45 DNA連接酶（ DNA ligase） ? DNA連接酶催化雙鏈 DNA一端 3ˊOH與另一雙鏈 DNA的 5ˊ端磷酸根 形成 3ˊ→5ˊ 磷酸二酯鍵，使具有相同粘性末端或平端的 DNA兩端連接起來。 ? 功能 ：運(yùn)送外源基因 高效轉(zhuǎn)入受體 細(xì)胞；為外源基因 提供復(fù)制能力或整合能力 ；為外源基因的 擴(kuò)增或表達(dá)提供必要的條件 ? 常用載體 ： 克隆載體，表達(dá)載體 如：質(zhì)粒載體，噬菌體載體， YAC，動(dòng)植物病毒等。 34 35 ? 基因組 DNA文庫， Genomic libraries : 含有某種生物體全部基因的隨機(jī)片段的重組 DNA克隆群體； ? cDNA文庫， cDNA libraries： 是指含有所有重組 cDNA的克隆群體。 ? 這種 熱變性 復(fù)性 延伸 的過程 就是一個(gè) PCR循環(huán)， PCR就 是這種循環(huán)的不斷重復(fù)。 ? 染色劑 溴化乙錠 (EB) 吖叮橙 EB可檢測到 ng級(jí)的 DNA， 熒光強(qiáng)度與 DNA數(shù)量成正比 27 操作過程 28 29 DNA分子大小的檢測 NEB， 1Kb DNA Ladder： 3kb=， 1kb= PCR產(chǎn)物 3Kb 1Kb 30 第三節(jié) 核酸的分子雜交 ? 雜交的基本原理：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下
化學(xué)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1