基因工程ppt課件(編輯修改稿)
2025-10-08 18:26 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 結(jié)合形成沉淀，而復(fù)性的 超螺旋質(zhì)粒 DNA分子 則以溶解狀態(tài)存在液相中，從而可通過(guò)離心將兩者分開(kāi)。 21 4. 核酸的檢測(cè) ? 包括 DNA的質(zhì)量、大小、純度檢測(cè) ? 紫外分光光度法 dsDNA： 1A260≈50ug/ml。 ssDNA: 1A260 ≈ 37ug/ml 。 RNA： 1A260 ≈ 40ug/ml。 寡聚核苷酸 ： 1A260 ≈ 30ug/ml。 A260/A280 ＝ ～ （ DNA）； ～ (RNA) 比值低，有蛋白質(zhì)、酚類等污染（ why?） ? 凝膠電泳法 22 凝膠電泳技術(shù) ? 樣品的物理性質(zhì) 分子大小、電荷、空間構(gòu)型 ? 支持物介質(zhì) 瓊脂糖， 10060000bp, 聚丙烯酰胺， 1500bp ? 電場(chǎng)強(qiáng)度 ， 5V/cm ? 緩沖液離子強(qiáng)度 TAE, TBE, TPE 23 電泳緩沖液是指在進(jìn)行分子 電泳時(shí)所使用的緩沖溶液 ，用以 穩(wěn)定體系酸堿度 。 緩沖液在電泳過(guò)程中的一個(gè)作用是維持合適的 pH。電泳時(shí)正極與負(fù)極都會(huì)發(fā)生 電解反應(yīng) ，長(zhǎng)時(shí)間的電泳將使 正極變酸，負(fù)極變堿 。一個(gè)好的緩沖系統(tǒng)應(yīng)有較強(qiáng)的緩沖能力，使溶液兩極的 pH保持基本不變。 24 電泳緩沖液的另一個(gè)作用是 使溶液具有一定的導(dǎo)電性 ，以利于 DNA分子的遷移，例如，一般電泳緩沖液中應(yīng)含有 +離子，Na+離子的濃度太低時(shí)電泳速度變慢；太高時(shí)就會(huì)造成過(guò)大的電流使膠發(fā)熱甚至熔化。 電泳緩沖液還有一個(gè)組分是 EDTA， 加入濃度為 12mmol/L，目的是螯合 Mg2+ 等離子，防止電泳時(shí)激活 DNA酶，此外還可防止 Mg2+離子與核酸生成沉淀。 25 瓊脂糖及聚丙烯酰胺凝膠 分辨 DNA片段的能力 凝膠 類型及濃度（ %） 分離 DNA片段的大小 (bp) Agarose 50000~1000 20220~1000 6000~300 PAG 1000~100 500~25 50~1 26 ? 指示劑 溴酚藍(lán)，二甲苯青 終止酶反應(yīng) 。 便于加樣 。 監(jiān)視實(shí)驗(yàn)進(jìn)行 。 ? 染色劑 溴化乙錠 (EB) 吖叮橙 EB可檢測(cè)到 ng級(jí)的 DNA， 熒光強(qiáng)度與 DNA數(shù)量成正比 27 操作過(guò)程 28 29 DNA分子大小的檢測(cè) NEB， 1Kb DNA Ladder： 3kb=， 1kb= PCR產(chǎn)物 3Kb 1Kb 30 第三節(jié) 核酸的分子雜交 ? 雜交的基本原理：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度及離
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