基因工程中常用的工具酶(參考版)
2025-01-22 08:53本頁(yè)面
【正文】 T4多聚核苷酸激酶 能將 ATP上的 γ位磷酸轉(zhuǎn)移到單鏈或雙鏈 DNA或 RNA的 5′OH上，可將 γ32PATP中的 32P連接到 5′端的 5′OH上，以完成寡聚核苷酸的核素標(biāo)記。此外也有類似于 SI酶單鏈特異降解活性，可除去粘性末端或單鏈發(fā)夾結(jié)構(gòu)。常用于使酶切位點(diǎn)中的堿基甲基化而避免降解，保護(hù)酶切位點(diǎn)。 dam可在限制酶識(shí)別的 5′GATC3 ′或 5′GAAT3 ′序列的 5′腺嘌呤 N6位上引入甲基。 – (2)用于避免單酶切后質(zhì)粒自我環(huán)化。 十、堿性磷酸酶 ? 該酶的功能是以單鏈或雙鏈的 DNA、RNA為基質(zhì)，將 DNA或 RNA片段 5’端的磷酸切除，產(chǎn)生 5’OH。 ? (3)可用核酸酶 S1分析 DNA ? (2)切除 cDNA中 單鏈發(fā)夾狀結(jié)構(gòu) 。 有些限制性內(nèi)切核酸酶可以將 DNA切成粘性末端 ， 經(jīng)過(guò)核酸酶 S1降解可切除 DNA末端的單鏈 。 五、末端脫氧核苷酰轉(zhuǎn)移酶 ? 可催化 DNA片段上的 3’OH端加接脫氧核糖核苷酸。 RNA或 DNA為模板 2. 3’外切 酶 活性 能使 DNARNA雜合鏈中的RNA降解。其外切酶活性比 DNA聚合酶 I的活性高 200倍。 ? （ 4） 補(bǔ)平粘性末端 。 ? 五、影響限制性內(nèi)切酶活性的因素 ? ? 2. DNA的甲基化 ? （ 1）基因工程使用失去甲基化酶的大腸桿菌 ? （ 2）研究基因工程 DNA的甲基化程度 ? （ 3）改變限制酶的識(shí)別特性 ? ? ? ? 星號(hào)活性 ? EcoRⅠ 切 GAATTC EcoRⅠ *切 pupuATpypy 或 AATT 第二節(jié) DNA連接酶和 DNA分子的體外連接 ? 一、 DNA連接酶
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