基因工程工具酶ppt課件(參考版)
2025-01-11 04:51本頁(yè)面
【正文】 酶 切 反 應(yīng) 的 基 本 步 驟 ＋ － 電泳 紫外分析 37℃ 1h 加反應(yīng)液 CK M Buffer (10 ) ?L ddH2O 約 ?L DNA ~ ?g Enzyme 1～ 2U Volume ?L CK M T T 。 (四 )限制性內(nèi)切酶反應(yīng)溫度 大多數(shù)酶的最佳反應(yīng)溫度為 37176。有些酶在某些緩沖液中會(huì)出現(xiàn)星號(hào)活性。 (三 )限制性內(nèi)切酶反應(yīng)緩沖液 生產(chǎn)廠家提供限制性內(nèi)切酶時(shí)，包裝中會(huì)附贈(zèng)該酶的最適 10 反應(yīng)緩沖液。 [DNA]過(guò)大，抑制酶活，影響酶分子擴(kuò)散 如： 4μg DNA/1U HpaⅠ 50μl 37℃ 15h 1μg DNA/1U HpaⅠ 50μl 37℃ 1h (二 )限制性內(nèi)切酶的用量 50μL Buffer中，含 1μg底物 DNA，于最適反應(yīng)條件和溫度下，保溫 1小時(shí)，能使 1μg DNA完全降解所需的酶蛋白量即為一個(gè)酶單位，用 U表示。 （ site preference） 某些限制性內(nèi)切酶對(duì)不同位置的同一個(gè)識(shí)別序列表現(xiàn)出不同的切割效率。 經(jīng) 同尾酶 消化的 DNA末端連接示意圖 5’ XXXXGGATCCXXXXXX 3’ 3’ XXXXCCTAGGXXXXXX 5’ BamH I 5’ XXXXG GATCCXXXXXX 3’ 3’ XXXXCCTAG GXXXXXX 5’ 5’ XXXXAGATCTXXXXXX 3’ 3’ XXXXTCTAGAXXXXXX 5’ Bgl II 5’ XXXXA GATCTXXXXXX 3’ 3’ XXXXTCTAG AXXXXXX 5’ 5’ XXXXA GATCCXXXXXX 3’ 3’ XXXXTCTAG GXXXXXX 5’ 5’ XXXXAGAT
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