基因工程中的酶ppt課件(參考版)
2025-01-08 09:16本頁(yè)面
【正文】 ：主要是連接 DNA片段與單個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵，在 DNA復(fù)制 中起作用。 47 ?該酶的用途是： ① 為化學(xué)測(cè)序法標(biāo)記 DNA 的 539。 2. 功能 催化 ?磷酸從 ATP轉(zhuǎn)給雙鏈或單鏈DNA或 RNA的 5’OH端。 磷酸，以 防止自身環(huán)化。 SDS中加熱 68oC可完全失活。 Bacterial alkaline phosphatase， BAP （ 1）細(xì)菌性堿性磷酸酶 （ 2）小牛腸堿性磷酸酶 Calf intestinal alkaline phosphatase， CIP 從小牛腸中純化出來(lái)。 42 逆轉(zhuǎn)錄酶的用途 以 oligo dT為引物（與 mRNA的 polyA尾巴互補(bǔ)結(jié)合）。 41 3. 逆轉(zhuǎn)錄酶 最普遍使用的是來(lái)源于 鳥類骨髓母細(xì)胞瘤病毒 （ avian myeloblastosis virus, AMV）： 依賴 RNA的 DNA聚合酶（ RNA指導(dǎo)的 DNA聚合酶）。 （ 1） Klenow fragment的性質(zhì) 39 ① 3’端補(bǔ)平 補(bǔ)平限制性內(nèi)切酶切后形成的 3’隱蔽端 。具有 5’?3’聚合酶活性和 3’?5’外切酶活性。 ③ 3‘→5 ‘的核酸外切酶活性 ④ 5‘→3 ‘的 DNA聚合酶活性 37 大腸桿菌 DNA聚合酶 I 的基本用途 5‘→3‘的 DNA聚合酶活性 38 2. Klenow fragment 用枯草桿菌蛋白酶處理大腸桿菌 DNA聚合酶 I可以切掉 N端的 5’?3’外切酶活性 部分。 35 第三 DNA聚合酶 一、基因工程中常用的 DNA聚合酶 DNA聚合酶 2. Klenow fragment 3. T7 DNA聚合酶 4. T4 DNA聚合酶 5. 修飾過(guò)的 T7 DNA聚合酶 6. 逆轉(zhuǎn)錄酶 36 二、 DNA聚合酶在基因工程中的用途 1. 大腸桿菌 DNA聚合酶 I （ 1）大腸桿菌 DNA聚合酶 I 的性質(zhì) ① 一條 單鏈多肽 。 三、連接反應(yīng)的溫度 1. 最佳溫度 但在 37℃ 下 粘性末端 的結(jié)合很不穩(wěn)定。 （ 2） DNA3’端有游離的 OH，
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