基因工程中的酶ppt課件-閱讀頁
2025-01-20 09:16本頁面
【正文】 ’CCC↓GGG3’, 同位酶 26 同裂酶（ Isoschizomers） ?有一些來源不同的限制酶識別的是同樣的核苷酸靶子序列，這類酶稱為同裂酶。由同尾酶產(chǎn)生的 DNA片段，是能夠通過其粘性末端之間的互補(bǔ)作用彼此連接起來的 BamHⅠ G GATC C BclⅠ T GATC A C CTAG G A CTAG T 28 從細(xì)菌 DNA環(huán)化現(xiàn)象推測，必定存在一種能把兩條 DNA雙鏈連接到一起的酶。 基因的 “ 針線 ” 29 DNA連接酶 在一條 DNA鏈的 3′ 末端具有一個游離的羥基（ OH），和在另一條 DNA鏈的5′ 末端具有一個磷酸基團(tuán)（ P）的情況下，能夠催化在兩條 DNA鏈之間形成的磷酸二酯鍵 30 （ 1）大腸桿菌連接酶 1. 兩種 DNA連接酶 只能連接 粘性末端。 31 （ 1）必須是兩條 雙鏈 DNA或 DNARNA。 （ 3）需要 能量 動物或噬菌體中： ATP 大腸桿菌中： NAD+ 2. 連接條件 32 33 DNA連接酶的基本性質(zhì) 34 連接酶反應(yīng)的最佳溫度是 37?C。 2. 實(shí)用溫度 所以一般采用 4~16 ?C。 ② 5’?3’外切酶活性位于 N端。就成為 Klenow fragment。（ 失去了5’?3’外切酶活性 ）。 （ 2）主要用途 3’ 3’ 40 ② DNA 3’末端標(biāo)記 在 3’隱蔽端 加上放射性標(biāo)記的 dNTP。 來源 RNA腫瘤病毒。 ① 43 44 第四 、堿性磷酸酶 1. 堿性磷酸酶種類 從大腸桿菌中分離出來。 具有抗熱性。 45 ?其用途是： 除去 DNA 片段的 539。 46 第五 、 T4多核苷酸激酶 1. 來源 從 T4感染大腸桿菌細(xì)胞中分離出來。 不論 5’OH端突出與否。 末端； 48 小結(jié) ： 切割 ：主要是連接 DNA片段之間的磷酸二酯鍵，起 連接 作用，在基因工程中起作用。
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