基因工程中常用的工具酶-資料下載頁(yè)
2025-01-19 08:53本頁(yè)面
【正文】 夾狀結(jié)構(gòu) ， 為了得到平末端 cDNA可用核酸酶 S1分解 ， 生成無(wú)發(fā)夾結(jié)構(gòu)的 cDNA。 ? (3)可用核酸酶 S1分析 DNARNA雜交分子的結(jié)構(gòu) 。 十、堿性磷酸酶 ? 該酶的功能是以單鏈或雙鏈的 DNA、RNA為基質(zhì)，將 DNA或 RNA片段 5’端的磷酸切除，產(chǎn)生 5’OH。 ? 應(yīng)用： – (1)用該酶催化切除 DNA或 RNA5’端的磷酸 ,然后加上 γ32PNTP在 DNA多聚核苷酸激酶的作用下標(biāo)記 5’端 。 – (2)用于避免單酶切后質(zhì)粒自我環(huán)化。 十一、 甲基化酶 ? 常見(jiàn)的有 dam甲基化酶和 dcm甲基化酶，可使相應(yīng)堿基甲基化。 dam可在限制酶識(shí)別的 5′GATC3 ′或 5′GAAT3 ′序列的 5′腺嘌呤 N6位上引入甲基。 dcm可在限制識(shí)別的5′CCAGG3 ′或 5′CCTGG3 ′序列的 5′胞嘧啶引入甲基。常用于使酶切位點(diǎn)中的堿基甲基化而避免降解，保護(hù)酶切位點(diǎn)。 核酸酶 BAL31 從線形 DNA分子兩端（粘端 /平端）以漸進(jìn)方式切去單核苷酸，以形成寡聚核苷酸或制造末端缺失。此外也有類似于 SI酶單鏈特異降解活性，可除去粘性末端或單鏈發(fā)夾結(jié)構(gòu)。 外切核酸酶 Ⅲ 能從線性 DNA的 3′OH末端沿 3 ′→ 5′ 方向切去單核苷酸，制造 3 ′端缺失，制備 DNA模板或特異 DNA探針。 T4多聚核苷酸激酶 能將 ATP上的 γ位磷酸轉(zhuǎn)移到單鏈或雙鏈 DNA或 RNA的 5′OH上，可將 γ32PATP中的 32P連接到 5′端的 5′OH上，以完成寡聚核苷酸的核素標(biāo)記。 八、外切核酸酶 Ⅲ 它的功能是將帶有 3 ’OH末端的雙鏈 DNA從3 ’到 5 ’端方向切除，產(chǎn)生 5 ’單核苷酸
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