基因工程中的酶ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-01-05 09:16本頁(yè)面
【正文】 5‘→3‘的 DNA聚合酶活性 38 2. Klenow fragment 用枯草桿菌蛋白酶處理大腸桿菌 DNA聚合酶 I可以切掉 N端的 5’?3’外切酶活性 部分。就成為 Klenow fragment。具有 5’?3’聚合酶活性和 3’?5’外切酶活性。（ 失去了5’?3’外切酶活性 ）。 （ 1） Klenow fragment的性質(zhì) 39 ① 3’端補(bǔ)平 補(bǔ)平限制性內(nèi)切酶切后形成的 3’隱蔽端 。 （ 2）主要用途 3’ 3’ 40 ② DNA 3’末端標(biāo)記 在 3’隱蔽端 加上放射性標(biāo)記的 dNTP。 41 3. 逆轉(zhuǎn)錄酶 最普遍使用的是來(lái)源于 鳥類骨髓母細(xì)胞瘤病毒 （ avian myeloblastosis virus, AMV）： 依賴 RNA的 DNA聚合酶（ RNA指導(dǎo)的 DNA聚合酶）。 來(lái)源 RNA腫瘤病毒。 42 逆轉(zhuǎn)錄酶的用途 以 oligo dT為引物（與 mRNA的 polyA尾巴互補(bǔ)結(jié)合）。 ① 43 44 第四 、堿性磷酸酶 1. 堿性磷酸酶種類 從大腸桿菌中分離出來(lái)。 Bacterial alkaline phosphatase， BAP （ 1）細(xì)菌性堿性磷酸酶 （ 2）小牛腸堿性磷酸酶 Calf intestinal alkaline phosphatase， CIP 從小牛腸中純化出來(lái)。 具有抗熱性。 SDS中加熱 68oC可完全失活。 45 ?其用途是： 除去 DNA 片段的 539。 磷酸，以 防止自身環(huán)化。 46 第五 、 T4多核苷酸激酶 1. 來(lái)源 從 T4感染大腸桿菌細(xì)胞中分離出來(lái)。 2. 功能 催化 ?磷酸從 ATP轉(zhuǎn)給雙鏈或單鏈DNA或 RNA的 5’OH端。 不論 5’OH端突出與否。 47 ?該酶的用途是： ① 為化學(xué)測(cè)序法標(biāo)記 DNA 的 539。 末端； 48 小結(jié) ： 切割 ：主要是連接 DNA片段之間的磷酸二酯鍵，起 連接 作用，在基因工程中起作用。 ：主要是連接 DNA片段與單個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵，在 DNA復(fù)制 中起作用。
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