基因工程中的酶ppt課件-在線瀏覽
2025-02-22 09:16本頁面
【正文】 制性內(nèi)切酶將侵入細菌體內(nèi)的 外源DNA切成小片斷。 （ 2）修飾（ Modification） ① Dam甲基化酶 GATC 腺嘌呤 N6位置引入甲基 ② Dcm甲基化酶 CCAGG或 CCTGG序列在第二個 C上 C5位置上引入甲基 11 12 R/M體系的作用： 保護自身的 DNA不受限制； 破壞外源 DNA使之迅速降解 13 切割不同來源的 DNA分子將產(chǎn)生特征性限制性酶切圖譜，具有重大應用價值（ “ 分子手術刀 ” ）。 二、限制性內(nèi)切酶的類型 II 類限制性內(nèi)切酶 III類限制性內(nèi)切酶 不適用于基因工程。 基因工程的工具酶 切割位點不在識別位點，一般離識別位點 25bp～ 27bp，對分子克隆操作亦無實用意義 15 首先由 . Smith和 . Wilcox在 1970年從流感嗜血菌中分離出來。 II類限制性內(nèi)切酶 分離的第一個酶是 Hind Ⅱ 16 （ 2）切割位點 切開 雙鏈 DNA。 識別位點處。不易重新環(huán)化。 分兩種類型： ① 5’端凸出（如 EcoR I切點） G?AATTC CTTAA G G AATTC CTTAA?G 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 3’ 5’ 20 CTGCA?G ② 3’端凸出（如 Pst I切點） G?ACGTC 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ CTGCA G G ACGTC 5’ 3’ 21 與 DNA結合的限制性內(nèi)切酶 BamH 1的結構。這個切割形成帶有兩個有 5‘粘性末端的 DNA片段。 22 ① 連接便利 （ 5）粘性末端的意義 i）不同的 DNA雙鏈： 只要粘性末端堿基互補就可以連接。 這比連接兩個平齊末端容易的多。 粘性末端可以用 DNA聚合酶補平成平齊末端。 Sma I 5’C↓CCGGG3’, Xma I 5
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