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2025-01-05 09:17本頁面
【正文】 uclease） 以核酸為底物的水解酶 按底物專一性分： RNase、 DNase、非專一性核酸酶 按作用位點分： 內(nèi)切酶或外切酶 5’核酸酶或 3’核酸酶 常用 :BAL31核酸酶、 S1核酸酶、綠豆核酸酶、 RNaseA、 RNaseT DNaseⅠ 、 外切核酸酶 Ⅲ 、 λ 噬菌體外切核酸酶等。 許多核酸酶兼有內(nèi)切和外切活性 44 內(nèi)切核糖核酸酶 ,專用 降解 RNA 為 DNA內(nèi)切核酸酶 ,水解單鏈或雙鏈 用途 :(1)缺口平移標(biāo)記探針時產(chǎn)生隨機(jī)切口 (2)降解 DNA 45 3. S1核酸酶 作用 :降解單鏈 DNA或 RNA(酶量小 ) 降解雙鏈 DNA(酶量大 ) 用途 :(1)去除 DNA突出端 ,切為平頭 (2)切除 cDNA發(fā)夾結(jié)構(gòu) III(ExoIII) 作用 :從雙鏈 DNA3’OH 逐一降解單核苷酸 不降解單鏈 DNA或 3’突出的雙鏈 DNA 用途 :系列缺失亞克隆 46 核酸酶的分類 內(nèi)切酶 ── 非專一性 ── 外切酶 ─ 3＇ 核酸酶 核酸酶 ─ 內(nèi)切酶 ─ ─ 5＇ 核酸酶 ── RNA─ 外切酶 ─ 專一性 ─ ─非限制性 ── 內(nèi)切酶 ─ ─限制性 ── DNA─ ── 外切酶 47 八、 甲基化酶（ Methylase） 1. Dam 甲基化酶 在 GATC 序列中的腺嘌呤 N6 位置上引入甲基 。 限制酶（ PvuⅡ , BamHⅠ 、 BclⅠ 、 BglⅡ 、 XhoⅡ 、 MboⅠ、 Sau3AⅠ ）的識別位點中含 GATC 序列。 2. Dcm 甲基化酶 識別 CCAGG 或 CCTGG 序列，在第二個胞嘧啶 C 的 C5 位置上引入甲基 。 受 Dcm 甲基化作用影響的酶有 EcoRⅡ （ ↓CCWGG） 48 3. EcoKⅠ 甲基化酶 識別位點少，識別 AAC（ N） 6GTGC 和 GCAC（ N）6GTT 序列中 A 的 N6 位置 。 4. SssⅠ 甲基化酶 來自原核生物 Spiroplasma ，可使 CG 序列中的 C 在 C5 位置上甲基化。 敏感酶：如 AatⅡ 、 ClaⅠ 、 XhoⅠ 、 SalⅠ 等 。 49 ： HincⅡ 可識別四個位點（ GTCGAC、 GTCAAC、 GTTGAC 和 GTTAAC），甲基化酶 Ⅰ 處理 DNA 后，將 TCGA 中的 A甲基化 ，所以 GTCGAC 將不受 HincⅡ 切割。 ： DpnⅠ 是依賴甲基化的限制酶， TCGATCGA 受 Ⅰ 處理后形成甲基化（ A）產(chǎn)物 TCG*ATCG*A ，其中 G*ATC 即為 DpnⅠ 位點。 ：在研究哺乳動物 m5CG 、植物 m5CG 和 m5CNG 、腸道細(xì)胞 Gm6ATC 的甲基化水平和分布時，可利用限制酶對甲基化的敏感性差異，進(jìn)行分析 50 九、其它酶 1. 蛋白酶 K （ Proteinase K） 是具有高活性的絲氨酸蛋白酶，可以水解范圍廣泛的肽鍵，尤其適合水解羧基末端至芳香族氨基酸和中性氨基酸之間的肽鍵。 用途 :去除殘留的酶類以及樣品中的蛋白質(zhì) 2. 溶菌酶（ Lysozymes） 是一類水解細(xì)菌細(xì)胞壁中肽聚糖的酶，在分子克隆中常用的是卵清溶菌酶。 用途 :破碎細(xì)胞
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