基因工程工具酶簡(jiǎn)化版(編輯修改稿)
2025-06-22 06:03 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 收待用的 DNA片段上 ， 若完全酶切 ， 勢(shì)必將此待用的 DNA片段從中切斷 。 在此情況下 ， 對(duì) DNA樣品進(jìn)行部分酶切 ， 經(jīng)過(guò)凝膠電泳 ， 根據(jù)待用 DNA片段的大小 ， 可回收待用的 DNA片段 DNA分子的限制性圖譜 五 、影響核酸內(nèi)切限制酶活性的因素 （ 1） DNA的純度 （ 2） DNA的甲基化程度 （ 3） 酶切消化反應(yīng)的溫度 （ 4） DNA的分子結(jié)構(gòu) （ 5）星星活性 第三節(jié) DNA聚合酶 間斷 (discontinuity)： 在 DNA的一條鏈上某一位置兩個(gè)相鄰的核苷酸之間的磷酸二酯鍵發(fā)生斷裂。 缺刻 (nick)： 某一位置上丟失了一個(gè)或幾個(gè)核苷酸。 （ 1）以 DNA聚合酶 I為代表的“合成型” （ 2）以 klenow聚合酶為代表，只有聚合酶活性和部分外切酶的活性 （ 3）逆轉(zhuǎn)錄酶類，以 RNA作為聚合模板 根據(jù)模板和作用方式的不同分為三類： 二、大腸桿菌 DNA聚合酶 I（ 全酶） 性質(zhì) : ① 5’ → 3’ DNA聚合酶活性 ② 3’ → 5’ 外切核酸酶活性 ③ 5’ → 3’ 外切核酸酶活性 三、大腸桿菌 DNA聚合酶 I大片段 （ Klenow片段） 性質(zhì) 它具有 5’ → 3’ 聚合活性和 3’ → 5’ 外切酶活性 ,失去了 5‘ → 3‘ 的核酸外切酶活性 . 四、 T4噬菌體 DNA聚合酶 性質(zhì) 具有 5’ → 3’ 聚合酶活性及 3’ → 5’ 外切核酸酶活性 。 其3’ → 5’ 外切酶活性對(duì)單鏈 DNA的作用比對(duì)雙鏈 DNA的作用更強(qiáng) 。 它的外切核酸酶活性比 kenow片段要強(qiáng) 200倍 。 用途 1） 補(bǔ)平或標(biāo)記限制性內(nèi)切酶消化 DNA后產(chǎn)生的 3’ 凹端 。 2） 對(duì)帶有 3’ 突出端的 DNA分子進(jìn)行末端標(biāo)記 。 五、 T7噬菌體 DNA聚合酶 性質(zhì) 持續(xù)合成能力最強(qiáng) 3’ → 5’ 外切核酸酶活性為 klenow片段的 1000倍 沒(méi)有 5’ → 3’ 外切酶活性 。 主要用途 1） 用于拷貝長(zhǎng)段模板的引物延伸反應(yīng) 。 2） 通過(guò)補(bǔ)平或交換 （ 置換 ） 反應(yīng)進(jìn)行快速末端標(biāo)記 。 六、 Taq DNA聚合酶 具有 5’ → 3’ 外切核酸酶活
公司管理相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1