市場營銷第三章基因工程第一節(jié)基因工程工具酶wangjx(編輯修改稿)
2025-03-28 11:44 本頁面
【文章內容簡介】 3. 外切酶活性特點 1) 反應底物：互補 dsDNA 2) 堿基釋放速度： CATG 3) 反應產物： 5’ 單磷酸核苷和具缺口或 5’ 端突起的 dsDNA，過度反應將導致 DNA降解 4. 用途 1) 核酸（ DNA）標記 2) 基因突變 缺失 3) DNA序列測定時作順序缺失 5. 使用注意事項 1) 正式使用前，測定在一定條件下酶的反應速度 2) 在一定條件下， ExoIII不能作用 GC富集區(qū) (來自于 cDNA加尾 ) dsDNA結構 : 切口 , 缺口 , 斷口 缺口 (gap) 切口 (nick) 斷口 (cut) 339。HO P539。 339。HO P539。 539。P 539。P 539。P 539。P 539。P 339。HO 339。HO 339。HO 339。HO 339。HO 339。HO 339。HO 339。HO OH339。 OH339。 OH339。 OH339。 P539。 P539。 P539。 P539。 P539。 P539。 P539。 339。HO P539。 OH339。 P539。 RNaseH ExoIII的外切酶和 RNaseH的作用 1 2 3 4 a b c 1 2 3 4 a b c 1 2 3 4 a b c 1 2 3 4 a b c 1 2 3 4 a b c 2 3 4 a b c 3 4 a b c 4 a b c a b c ExoIII用于順序缺失 ExoIII ExoIII [α 32P] [α 32P] dCTP dCTP 539。P P539。 539。P P539。 339。HO OH339。 339。HO OH339。 ExoIII 用于 DNA 標記 （二）、 RNase（三）、 RNaseH （二）、 RNase 大部分用于 RNA的核苷酸序列分析或除去 DNA樣品或蛋白質合成系統(tǒng)中的 RNA分子。 1. RNase A 分離自牛胰臟，對熱穩(wěn)定，抗去污劑（ 100℃加熱 15min仍具活性） , 用于除去 DNA樣品中的 RNA分子 2. 核酸酶 S7， 亦稱微球菌核酸酶，對 RNA敏感，用于除去蛋白質合成系統(tǒng)中的內源 mRNA （ 三 ） 、 RNase H 作用于 DNARNA雜交分子中的 RNA鏈，用于 cDNA文庫建立時除去 RNA鏈以便第二條鏈 cDNA鏈的合成。 （四）、 DNase I 1. 特點： 具內切酶活性，作用于 ds DNA，但無核苷酸序列特異型，產生 5’ P低聚核苷酸 。 Ca2+ , Mg 2+ 或 Ca2+ , Mn2+可使酶活達最大值 當酶濃度很低時， ds DNA分子上將形成切口，不同類型二價陽離子對兩條鏈上切口位置形成有以下影響： Mg 2+存在時，兩條鏈上的切口獨立無關， Mn2+存在時，兩條鏈上的切口幾乎在同一位置 2. 用途 1) 切口移位，制備 DNA探針 2) 制備 RNA樣品時除去 DNA分子 3) 基因突變時產生切口 Mn++存在時 Mg++存在時 DNaseI 作用特點 DNaseI HO P 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ DNaseI與 Pol I 的 切口移位 Pol I 四、聚合酶 包括 DNA聚合酶和 RNA聚合酶 （一）、 DNA聚合酶 I（ polI） 1. 的 DNA聚合酶系統(tǒng) Pol I 參與 DNA修復 , 具 3’ →5 ’和 5’ →3 ’ 外切酶活性 pol II 同上 具 3’ →5 ’外切酶活性 pol III 參與 DNA復制 , 具 3’ →5 ’和 5’ →3 ’ 外切酶活性 2. polI的特點 1）具兩種外切酶活性和 DNA聚合酶活性，在蛋白酶作用下，該酶分裂成兩個大小不同的片段，其中小片段具 5’ →3 ’ 外切酶活性，大片段具3’ →5 ’外切酶活性 (大片段亦稱為 Klenow片段 , polIK) 2） 聚合酶活性， 5’ →3 ’ , 要求 3’ OH引物和模板 DNA，其延續(xù)性受反應條件的影響 3） 外切酶活性 3. 用途 1） 除去 3’ 端突起的單鏈 DNA（在無 dNTP時） 2） 補齊 5’ 突起端 3） 合成第二條 cDNA 4） 切口移位制備探針 其中用途 2) 和 3)常用大片段 （二）、 T4 DNA聚合酶 1. 特點： 5’
語文相關推薦
鄂ICP備17016276號-1