基因工程常用的工具酶-資料下載頁(yè)
2025-01-06 02:26本頁(yè)面
【正文】 ℃ ） 時(shí)間（ min） 94 72 60 循環(huán) 1 循環(huán) 2 循環(huán) 3 PCR反應(yīng)的溫度循環(huán)周期 ?特點(diǎn) ? 待擴(kuò)增的 DNA鏈限定在模板上的退火位點(diǎn)之間 ? 待擴(kuò)增 DNA鏈得到迅速大量擴(kuò)增 ?反應(yīng)體系組成 ?影響因素 ? 模板 ? dNTP ? DNA聚合酶 ? 引物 A、 B ? MgCl2 ? 引物的設(shè)計(jì) ? 退火溫度 ? MgCl2濃度 第四節(jié) DNA修飾酶 一、末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶 末端轉(zhuǎn)移酶（ TDT）：在沒有模板存在的條件下，能催化 dNTP隨機(jī)加于 DNA分子的 3‘OH端 5‘ p 3‘ HO OH 3‘ p 5‘ TDT Mg2+ dATP AAAAAAAAAAAA OH 3‘ 5‘ p 3‘ HO p 5‘ 同聚物尾巴 Poly（ dA） 作用底物： ? 帶 3’OH末端的單鏈 DNA 5‘ p OH 3‘ TDT Mg2+ dATP AAAAAAAAAAAA OH 3‘ 5‘ p ? 帶 3’OH單鏈突出末端的雙鏈 DNA 5‘ p 3‘ HO OH 3‘ p 5‘ TDT Mg2+ dATP 5‘ p 3‘ HO AAAAAAAAAAAAAA OH3‘ p 5‘ ? 帶 3’OH平齊末端的雙鏈 DNA 5‘ p 3‘ HO OH 3‘ p 5‘ TDT Co2+ dATP 5‘ p 3‘ HO AAAAAAAAAAA AAAAAAAAAA OH 3‘ p 5‘ 用途： ? 外源 DNA與載體的重組 ? DNA片段 3‘端標(biāo)記 二、堿性磷酸酶 細(xì)菌堿性磷酸酶（ BAP）：來(lái)自 小牛腸堿性磷酸酶（ CIP）：來(lái)自小牛腸 ?作用： 催化核酸分子脫去 5’P 5‘ p OH 3‘ DNA or RNA 5‘ ppp dNTP 5‘ pppNTP BAP / CIP OH 3‘ 5‘ HO 5‘ HO dNTP 5‘ HO NTP ?用途： ? 防止載體自身環(huán)化 ? 5‘端標(biāo)記時(shí)去磷酸化 三、 T4多核苷酸磷酸激酶（ T4PNP） ? 特性：催化 γ P從 ATP分子轉(zhuǎn)移給 DNA/RNA的 5’ OH端 ? 作用： 5’ 端同位素標(biāo)記 5‘ HO 3‘ HO OH 3‘ OH 5‘ T4PNP Mg2+ pppATP（ g32PATP） 5‘ p 3‘ HO OH 3‘ p 5‘
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