基因工程常用的工具酶-文庫吧資料
2025-01-12 02:26本頁面
【正文】 eⅢ 的切割位點 大部分酶的切割位點在識別序列內(nèi)部或兩側(cè) 部分限制酶能識別多種核苷酸序列 5‘ … G C G T Py Pu A C G A G … 3’ 3‘ … C G C A Pu Py T G C T C … 5’ HindⅡ 的識別序列 Py dCMP、 dTMP Pu dAMP、 dGMP 識別序列呈典型的旋轉(zhuǎn)對稱型 回文結(jié)構(gòu) 5‘ … G C T G A A T T C G A G … 3’ 3‘ … C G A C T T A A G C T C … 5’ EcoR I的識別序列 EcoR I的切割位點 回文結(jié)構(gòu) :兩條核苷酸鏈的核酸序列呈雙重旋轉(zhuǎn)對稱排列的 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu) 三、 Ⅱ 型限制酶的特性 切割后形成的末端 粘性末端： 5‘ … GTGAATTCGA … 3’ 3‘ … CACTTAAGCT … 5’ EcoR I 5‘ … GTG AATTCGA … 3’ 3‘ … CACTTAA GCT … 5’ 平齊末端： 5‘ … GAGGCCGAG … 3’ 3‘ … CTCCGGCTC … 5’ 5‘ … GAGG CCGAG … 3’ 3‘ … CTCC GGCTC … 5’ HaeⅢ 彼此具有互補(bǔ)核苷酸的單鏈延伸末端 三、 Ⅱ 型限制酶的特性 同尾酶、同裂酶 同尾酶 :來源各異、識別序列也不相同，但都產(chǎn)生相同粘性 末端的一類限制酶 5‘ … GTGGATCCGA … 3’ 3‘ … CACCTAGGCT … 5’ BamH I 5‘ … GTG GATCCGA … 3’ 3‘ … CACCTAG GCT … 5’ 5‘ … GTTGATCAGA … 3’ 3‘ … CAACTAGTCT … 5’ Bcl I 5‘ … GTT GATCAGA … 3’ 3‘ … CAACTAG TCT … 5’ BamHI、 BclI為一組同尾酶 同裂酶 :來源各異，但識別相同核酸序列的一類酶 5‘ … GTGATCGA … 3’ 3‘ … CACTAGCT … 5’ Sau3A I 5‘ … GAGATCCA … 3’ 3‘ … CTCTAGGT … 5’ MboI 5‘ … GTCCCGGGGA … 3’ 3‘ … CAGGGCCCCT … 5’ XmaI 5‘ … GTCCCGGGGA … 3’ 3‘ … CAGGGCCCCT … 5’ SmaI 四、影響限制酶活性的因素 DNA的純度： 蛋白質(zhì)、苯酚、氯仿、 EDTA、 SDS 增加限制酶用量 擴(kuò)大酶催化反應(yīng)體系 延長酶催化時間 DNA的甲基化程度： 反應(yīng)溫度： DNA的分子結(jié)
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