基因工程中的酶ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-01-11 09:16本頁(yè)面
【正文】 5’端有一個(gè)磷酸基團(tuán)（ P）。 二、 DNA ligase的特點(diǎn) （ 2） T4噬菌體的連接酶 不但能連接粘性末端， 還能連接 齊平末端 。 第二 DNA 連接酶 一、 DNA連接酶（ ligase)的發(fā)現(xiàn) DNA復(fù)制一定有斷口。同裂酶產(chǎn)生同樣的切割，形成同樣的末端 ? Example: 限制酶 HpaⅡ 和 MspⅠ 是一對(duì)同裂酶 (CCGG) ， 5 C .CGG 3 3 GGC .C 3 27 同尾酶（ Isocaudamer） ?這一類的 限制 酶來(lái)源各異，識(shí)別的靶 序列也不相同，但產(chǎn)生相同的粘性末端。 25 ?同位酶是具有相同的識(shí)別序列，但酶切位點(diǎn)不同的酶 如 Sma I和 Xma I的識(shí)別序列為 5’CCCGGG3’,但酶切位點(diǎn)不同。 23 24 ③ 補(bǔ)平成平齊末端 ② 5’末端標(biāo)記 凸出的 5’末端 可用 DNA多核苷酸激酶進(jìn)行 32P標(biāo)記。 ii）同一個(gè) DNA分子內(nèi)連接： 通過(guò)兩個(gè)相同的粘性末端可以連接成 環(huán)形分子 。這種蛋白質(zhì)是有相同的亞基組成的二聚體。限制性內(nèi)切酶識(shí)別雙鏈 DNA序列 5‘GGATCC3’，并在兩個(gè) GG殘基之間切開(kāi)磷酸二酯鍵。 18 ?兩條鏈上的斷裂位置是交錯(cuò)地，但又是圍繞著一個(gè)對(duì)稱結(jié)構(gòu)中心，這樣形成的斷裂結(jié)果形成具有粘性末端的DNA片段 （ 4）粘性末端（ sticky ends， cohensive ends） 19 含有幾個(gè)核苷酸 單鏈 的末端。 17 EcoR V 5’GAT?ATC3’ 3’CTA?TAG5’ 產(chǎn)生平齊末端 （ 3）平末端（ blunt end ） 兩條鏈上的斷裂位置是處在一個(gè)對(duì)稱結(jié)構(gòu)的中心 ,這樣形式的斷裂是形成具有平末端的 DNA片斷。形成 粘性末端 （ sticky end）或 平齊末端 （ blunt end）。 （ 1）識(shí)別位點(diǎn)序列 未甲基化修飾 的 雙鏈 DNA上的特殊靶序列（多數(shù)是回文序列）。只在腸道菌中發(fā)現(xiàn)。 14 I 型限制性內(nèi)切酶 目前鑒定出 三種不同
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