基因工程原理-第二章dna重組-資料下載頁
2025-01-07 17:53本頁面
【正文】 3’32PGA???5’5’GATCT???3’3’32PAGA???5’具有 3’隱蔽末端的 DNA片段Klenow酶， 32PGTP（加入的種類根據(jù) 5’末端決定）Klenow酶， 32PGTP， 32PATP? 補平雙鏈 DNA的 3’ 凹端。? 標記 DNA片段的末端：帶標記的 dNTPDNA序列測定： Sanger末端終止法CGTACCTCGTTCATGACAAGCGTCTCAddGAGTddCGCAGAGTddTGTTCGCAGAGTddACTGTTCGCAGAGT*********Klenow片段（三） T4 DNA聚合酶? 從 T4噬菌體中分離的? 噬菌體基因 43編碼? 具有 5’→3’ 聚合酶活性? 具有 3’→5’ 核酸外切酶活性，是 Klenow片段的 200倍左右。? 取代反應。取代反應特點：? 當反應混合物中沒有 dNTP時， T4DNA聚合酶只有 3’5’核酸外切酶活性，從 3’OH端降解 DNA。? 當反應混合物中僅有 1種 dNTP時， 3’端降解在暴露出 互補 的核苷酸時停止。32P標記的核苷酸5’5’3’3’A T C G T A C A GT A G C A T G T C5’5’3’3’A T C G T A C C A T G T C5’5’3’3’A T C G T A C A GT A G C A T G T GT4 DNA聚合酶， dGTP具有 3’OH末端的 DNA片段加入 32P dNTPs32P標記的核苷酸逐漸取代了外切酶刪掉的原有核苷酸 —— 取代反應。（四）反轉(zhuǎn)錄酶—— 把 RNA轉(zhuǎn)錄成 DNA的酶。又叫依賴 RNA的 DNA聚合酶，或 RNA指導的 DNA聚合酶。 1970年發(fā)現(xiàn)，在多種腫瘤病毒中發(fā)現(xiàn)，常見的AMV（鳥類骨髓母細胞瘤病毒的反轉(zhuǎn)錄酶）。包括：α鏈： 65103dalβ鏈： 95103dalDNA mRNA protein轉(zhuǎn)錄 翻譯反轉(zhuǎn)錄自我復制酶活性：? RNA指導的 DNA聚合酶活性? DNA指導的 DNA聚合酶活性? RNaseH活性： RNaseH是一種專門切割 DNA與 RNA雜交鏈上 RNA分子的酶RNA模板DNA引物AMVDNARNAAMVAMV —— 催化以 DNA和 RNA為模板 ，以 4種 三磷酸核苷（ATP、 UTP、 CTP、 GTP)為底物，合成一條與模板序列互補的 RNA新鏈的酶。四、 RNA聚合酶（一）依賴 DNA的 RNA聚合酶SP6噬菌體 RNA聚合酶T4或 T7噬菌體 RNA聚合酶種類用途：制備 cRNA探針（二）依賴 RNA的 RNA聚合酶五、 DNA修飾酶?脫氧核糖核酸酶 I：隨機水解 DNA雙鏈或單鏈?核糖核酸酶：去除 DNA制備物中 RNA?外切核酸酶：從 DNA或 RNA鏈一端開始順序催化水解 3‘、 5’－磷酸二酯鍵?末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶：末端加尾?堿性磷酸酯酶：催化分子脫 5‘磷酸基?T4多聚核苷酸激酶：將 ATP中 γ－磷酸基 轉(zhuǎn) 移到 DNA或 RNA分子 5’－ OH?甲基化酶：GATC G6mATCDam甲基化酶CC(A/T)GG C5mC(A/T)GGDcm甲基化酶大腸桿菌6演講完畢，謝謝觀
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