基因工程重組人干擾素-資料下載頁
2025-06-27 02:40本頁面
【正文】 懸液 , 用微量板在37 ℃含 5%C 馬的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。用不同稀釋度的 IFN 溶液加入各孔后再培養(yǎng) 7 h 。每孔加入 含 100~1000TcID50 濾過性口腔炎病毒 (VSV) 進(jìn)行病毒攻擊。將病毒對(duì)照組與細(xì)胞對(duì)照組進(jìn)行比較便可以測(cè)得其抗病毒活性。六、新型干擾素1. 活性增加的干擾素通過定點(diǎn)突變或干擾素的嵌合可提高干擾素的活性 , 如將重組干擾素自 17 位的 Cys 改為 Ser, 可提高抗病毒活性 10 倍。新型雜合的 IFN α D 對(duì) NK 細(xì)胞的調(diào)節(jié)能力比親本提高了 10~400 倍 , 如將 IFN α 4 與 IFNtl 進(jìn)行嵌合 , 得到的 IFN 活性分別是親代的 4 倍及 20 倍。而用鼠 IFNt1 的 A 段與 IFN 飩的 B 段進(jìn)行雜交 , 活性可提高 10~100 倍。此外 , 如上面介紹的將 IFN 與 TNF 結(jié)合 , 可以產(chǎn)生不同的活性。2. 穩(wěn)定性增加的干擾素仍以上面提到的重組 IFN R 為例 , 親代干擾素在一 70 ℃ 75d 后大多數(shù)喪失抗病毒活性 , 而突變后在同樣條件下保存 150d 仍不失活。3. 改變抗原性的干擾素如將 IFN 仇的 141 位上 Cys 用 Tyr 代替 , 則其抗原性發(fā)生改變 , 不與體內(nèi)自然存在的 IFN 在 1 爭(zhēng)奪受體 , 雖然這種抗原性改變的機(jī)率很小 , 但仍不失為一種研究方向。4. 改變種屬特異性的干擾素IFN α D 在牛細(xì)胞株中活性最高 ,IFN α A 在人細(xì)胞系中活性最高 , 而其嵌合體與兩個(gè)親本都不相同 , 在鼠細(xì)胞中的活性最高。第三節(jié)應(yīng)用一、臨床治療方面干擾素作為較早被研究的用基因工程方法合成的生物活性物質(zhì) , 雖然在基因的調(diào)取、構(gòu)建、表達(dá)方面仍有較多的工作在進(jìn)行中 , 但研究的熱點(diǎn)已經(jīng)轉(zhuǎn)移到了臨床應(yīng)用及臨床前的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面 , 并且在較多疾病的治療方面取得了進(jìn)展。1. 抗病毒目前的研究主要集中于抗各類肝炎病毒方面 , 在抗 HIV 、抗 HSV 等方面也有較多的研究。2. 提高免疫系統(tǒng)機(jī)能在小鼠實(shí)驗(yàn)中重組 IFN γ對(duì) NK 細(xì)胞的活性、吞噬細(xì)胞的溶解性、絲裂原誘導(dǎo)的母細(xì)胞化均有促進(jìn)作用 , 同時(shí)減少外周血及骨髓量。在牛體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)表明 , IFN γ可以增強(qiáng)免疫抑制動(dòng)物的免疫系統(tǒng)活性。3. 抗腫瘤通過與糖基化的淋巴細(xì)胞毒素嵌合 ,IFN γ可以提高小鼠對(duì) HT1080 纖維肉瘤、 G,361 惡性黑色素瘤、 ZR751 乳腺瘤等腫瘤的抗性。在臨床前研究方面 , 重組 IFNek 缸用于擴(kuò)散性間皮瘤已進(jìn)入 E 期臨床階段。重組 IFN γ與重組 TNF α聯(lián)合用于腫瘤治療也已完成 I 期臨床工作。通過調(diào)節(jié)單核細(xì)胞內(nèi)腺昔酸環(huán)化酶的活性 , 重組 IFNy 可以對(duì)特應(yīng)性皮炎病人的癥狀起到一定的緩解作用。通過重組 IFN 噸 C 的抑制增生作用可以防止骨髓異常增生引起的血小板過量溶解。此外 , 抗寄生蟲方面的研究表明 ,IFN γ作用于宿主細(xì)胞 , 可以增強(qiáng)其對(duì)寄生蟲的抵抗力 O二、基礎(chǔ)研究方面利用 PCR 方法可以在干擾素或嵌合干擾素 , 如 IFN α A 心的氨基端加上一段核昔酸序列 :AGA AGG GCA AGT GTT, 其編碼的氨基酸序列為 Arg Arg Ma Ser Val, 可以用于 c 燦 fP 的蛋白激酶識(shí)別。在 [ γ ,32p]ATP 存在的情況下 , 干擾素被 32p 標(biāo)記且不影響其活性。用這種帶有放射性的干擾素可以對(duì)干擾素的識(shí)別位點(diǎn)及其藥物動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究。狗的 IFN γ與細(xì)胞因子和細(xì)胞嵌合后可以被抗干擾素的單克隆抗體所識(shí)別 , 并且有如下應(yīng)用 : ①水泡性口炎病毒噬菌斑抑制實(shí)驗(yàn) 。 ②在狗腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞中兩類主要組織相容性復(fù)合物抗原基因上游進(jìn)行調(diào)控 。 ③在試管中組織相關(guān)性淋巴細(xì)胞增生的放大中發(fā)揮作用 , 利用這個(gè)性質(zhì)可以研究器官移植中細(xì)胞因子的活動(dòng)情況 , 并可用于診斷和治療。對(duì)用基因工程方法生產(chǎn)干擾素已經(jīng)進(jìn)行了 40 多年的研究 , 并且取得了較為喜人的成就。 IFN 成為第一個(gè)上市的基因工程藥物 , 也是一種人們可以用得起的生物活性藥物 , 標(biāo)志了基因工程從實(shí)驗(yàn)室研究進(jìn)入醫(yī)藥臨床實(shí)踐 , 因此是生命科學(xué)發(fā)展歷程中的一個(gè)里程碑。但這并不表示基因工程方法在干擾素方面的應(yīng)用已經(jīng)沒有未開發(fā)的領(lǐng)域 , 相反 , 這些成就的取得為新的研究方向的確立以及新的應(yīng)用提供了思路及條件 , 并為其他生物活性物質(zhì)的基因工程方法合成提供了一種有益的借鑒 , 在此過程中也促進(jìn)了其自身的發(fā)展。相信在不久的將來 , 基因工程方法生產(chǎn)的干擾素會(huì)在疾病的診斷及治療方面發(fā)揮更大的作用 , 同時(shí)也成為生命科學(xué)研究中的一種有效的工具。15 / 15
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