第14章基因重組和基因工程_2-資料下載頁
2025-01-07 15:09本頁面
【正文】 移酶 + dATP 末端轉移酶 + dTTP T4 DNA連接酶 15186。C 重組體 5180。 目錄 由平端加上新的酶切位點，再用限制酶切除產(chǎn)生粘性末端，而進行粘端連接 。 4. 人工接頭 (linker)連接 人工接頭及其應用 CCGAATTCG GGCTTAAGC 5180。 3180。 Eco RⅠ Eco RⅠ Eco RⅠ Eco RⅠ 目錄 ?受體菌條件： 安全宿主菌 限制酶和重組酶缺陷 處于感受態(tài) (petent) ?導入方式： 轉化 (transformation) 轉染 (transfection) 感染 (infection) （四）重組 DNA導入受體菌 目錄 1. 直接選擇法 (1) 抗藥性標記選擇 (2) 標志補救 (marker rescue) (3) 分子雜交法 原位雜交 Southern印跡 2. 免疫學方法 如免疫化學方法及酶免檢測分析等 （五）重組體的篩選 (插入失活法) 抗藥性標記選擇 α互補 利用 α互補原理篩選重組體 pUC18 原位雜交 Southern印跡 雞的 β肌球蛋白的克隆和檢出 免疫學方法 目錄 重組 DNA技術操作過程可形象歸納為： 小結 分 分離目的基因 切 限制酶切目的基因與載體 接 拼接重組體 轉 轉入受體細胞 篩 篩選重組體 目錄 重組 DNA技術操作的主要步驟 載體 質(zhì)粒 噬菌體 病毒 目的基因（外源基因） 基因組 DNA cDNA 人工合成 PCR產(chǎn)物 限制酶消化 開環(huán)載體 DNA 目的基因 連接酶 重組體 轉化 體外包裝，轉染 帶重組體的宿主 篩選 表型篩選 酶切電泳鑒定 菌落原位雜交 目錄 表達體系的建立： ? 表達載體的構建 ? 受體細胞的建立 ? 表達產(chǎn)物的分離純化 （六）克隆基因的表達 目錄 ? 標準： 選擇標志 強啟動子 翻譯調(diào)控序列 多接頭克隆位點 ? ： 不宜表達真核基因組 DNA； 不能加工表達的真核蛋白質(zhì)； 表達的蛋白質(zhì)常形成不溶性包涵體 (inclusion body) ； 很難表達大量可溶性蛋白。 1. 原核表達體系 ( ) 大鼠胰島素原 cDNA 的表達和分泌 目錄 ? 優(yōu)點： 可表達克隆的 cDNA及真核基因組 DNA 可適當修飾表達的蛋白質(zhì) 表達產(chǎn)物分區(qū)域積累 ? 缺點： 操作技術難、費時、經(jīng)濟 ? 轉染 —— 將表達載體導入真核細胞的過程 方法： 磷酸鈣轉染 DEAE葡聚糖介導轉染 電穿孔 脂質(zhì)體轉染 顯微注射 （酵母、昆蟲、乳類動物細胞） 表達載體 pFASTBACI 的物理圖譜 表達載體 YEpI PT的物理圖譜 目錄 第三節(jié) 重組 DNA技術與醫(yī)學 的關系非常密切并前景遠大 DNA Rebination Technique is Closly Related with Medicine and has a Good Perspective 目錄 一、疾病基因的發(fā)現(xiàn)與克隆 根據(jù)基因定位克隆之并研究其性質(zhì)，而認識疾病的分子機制。 ? 疾病基因發(fā)現(xiàn)的兩個典型例子 : 脆性 X綜合征 Kallmann綜合征 目錄 二、生 物制藥 ?利用基因工程生產(chǎn)有藥用價值的蛋白質(zhì)、多肽產(chǎn)品已成為當今世界一項重大產(chǎn)業(yè)，并將有望成為 21世紀的支柱產(chǎn)業(yè)。 ?美國 Eli Lilly公司于 1982年首先利用重組DNA技術合成人胰島素并投放市場，標志著生物工程藥物時代的開始。迄今為止，已有50多種基因工程藥物上市，近千種處于研發(fā)狀態(tài)，形成一個巨大的高新技術產(chǎn)業(yè)，產(chǎn)生了不可估量的社會效益和經(jīng)濟效益。 目錄 重組 DNA醫(yī)藥產(chǎn)品 產(chǎn) 品 功 能 組織胞漿素原激活劑 抗凝 血液因子 VIII 促進凝血 顆粒細胞 巨噬細胞集落剌激因子 剌激白細胞生成 促紅細胞生成素 剌激白細胞生成 生長因子 (bFGF, EGF) 刺激細胞生長與分化 生長素 治療侏儒癥 胰島素 治療糖尿病 干擾素 (? 1b, ?2a, ? 2b, ?) 抗病毒感染及某些腫瘤 白細胞介素 激活、剌激各類白細胞 超氧化物歧化酶 抗組織損傷 單克隆抗體 利用其結合特異性進行診斷試驗、腫瘤導向治療 乙肝疫苗 (CHO, 酵母 ) 預防乙肝 口服重組 B亞單位菌體霍亂菌苗 預防霍亂 目錄 基因診斷 (geic diagnosis)是 利用分子生物學及分子遺傳的技術和原理 ， 在DNA水平分析 、 鑒定遺傳疾病所涉及基因的置換 、 缺失或插入等突變 。 又稱DNA診斷 。 三、基因診斷與治療 （一）基因診斷的概念 目錄 ?基本過程： 區(qū)分或鑒定 DNA的異常 分離、擴增待測的 DNA片斷 目錄 ? 能正確擴增靶基因； ? 能準確區(qū)分單個堿基的差別； ? 本底或噪聲低，不干擾 DNA的鑒定 。 ? 便于完全自動化操作，適合大面積、大人群普查。 ?標準： 目錄 （二）基因治療的概念 ?定義 基因治療 (gene therapy)是向有功能缺陷的細胞補充相應功能的基因，以糾正或補償其基因的缺陷，從而達到治療的目的。 ?方式 體細胞基因治療 (somatic cell gene therapy) 性細胞基因治療 (germ line gene therapy) 目錄 1. 產(chǎn)前診斷 2. 攜帶者測試 3. 癥候前診斷 4. 遺傳病易感性 四、遺傳疾病的預防 目錄 演講完畢，謝謝觀看！
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