基因工程第6章dna重組的操作1-資料下載頁(yè)
2025-01-07 17:55本頁(yè)面
【正文】 誘導(dǎo)法 三親本雜交法 重組重組 λDNA分子轉(zhuǎn)導(dǎo)大腸桿菌分子轉(zhuǎn)導(dǎo)大腸桿菌轉(zhuǎn)染：將重組 λDNA分子分子 直接 導(dǎo)入受體細(xì)胞的過(guò)程。導(dǎo)入受體細(xì)胞的過(guò)程。轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)導(dǎo) ：：通過(guò)通過(guò) λ噬菌體噬菌體 顆粒顆粒 感染宿主 細(xì)胞的途徑把外源細(xì)胞的途徑把外源 DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞內(nèi)的過(guò)程。分子轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞內(nèi)的過(guò)程。 P142轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化 :139 重組 DNA分子導(dǎo)入植物細(xì)胞 (P144)（ 1）農(nóng)桿菌介導(dǎo)的 Ti質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化法 革蘭氏陰性菌作用機(jī)制：216。將待轉(zhuǎn)移的目的基因組入農(nóng)桿菌中的 Ti質(zhì)粒載體216。農(nóng)桿菌識(shí)別敏感植物，將 Ti質(zhì)粒的 TDNA轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞內(nèi)部216。 選擇合適的外植體 根據(jù)受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力來(lái)決定216。 農(nóng)桿菌的接種 操作 （接種到損傷切面，使農(nóng)桿菌與外植體 共培養(yǎng) ）216。 洗菌并篩選培養(yǎng) （無(wú)菌水清洗共培養(yǎng)后的外植體，無(wú)菌濾紙吸干后轉(zhuǎn)移到篩選培養(yǎng)基上，殺死或抑制附著于表面的農(nóng)桿菌）農(nóng)桿菌介導(dǎo)外源基因轉(zhuǎn)化植物的基本程序：1. 創(chuàng)傷植株感染法 （ 植株接種共轉(zhuǎn)化法）2. 共培養(yǎng)感染法216。 葉盤轉(zhuǎn)化法216。 植物愈傷組織共培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法216。 植物懸浮細(xì)胞共培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法216。 原生質(zhì)體共培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法常用方法：創(chuàng)傷植株感染法（ 植株接種共轉(zhuǎn)化法）l 在整體植株上造成創(chuàng)傷l 農(nóng)桿菌接種在創(chuàng)傷表面或針頭注射農(nóng)桿菌l 農(nóng)桿菌以天然的感染過(guò)程在植株體內(nèi)感染l 獲得轉(zhuǎn)化的植物愈傷組織共培養(yǎng)感染法l 葉盤轉(zhuǎn)化法l 植物愈傷組織共培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法l 原生質(zhì)體共培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法l 植物懸浮細(xì)胞共培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法216。 葉盤轉(zhuǎn)化法? 葉子表面進(jìn)行消毒，再用消毒過(guò)的不銹鋼打孔器從葉子上取下圓形小片? 接種處理，放在農(nóng)桿菌培養(yǎng)液中浸泡數(shù)秒鐘 ? 濾紙吸干，看護(hù)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)? 培養(yǎng)兩天后，濾紙連同葉盤轉(zhuǎn)移到含有選擇藥物的 “ 長(zhǎng)芽 ” 培養(yǎng)基中，篩選與再生培養(yǎng)? 轉(zhuǎn)移到 “ 生根 ” 培養(yǎng)基上誘導(dǎo)幼芽生根植物愈傷組織共培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法216。愈傷組織與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)216。抗生素篩選培養(yǎng)216。誘導(dǎo)分化216。植株再生（ 2） DNA的直接轉(zhuǎn)移法216。 多聚物介導(dǎo)法216。 電穿孔轉(zhuǎn)化法216。 激光微束穿孔轉(zhuǎn)化法216。 顯微注射法216。超聲波介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法216。 基因槍法216。 脂質(zhì)體介導(dǎo)法216。 花粉管通道法216。 基因槍法 P146? 將 DNA吸附在由鎢制作的微型子彈 (直徑約為)表面? 通過(guò)特制的手槍，將子彈高速射入完整的細(xì)胞和組織內(nèi)? 轉(zhuǎn)化效率與射擊距離、真空度、子彈速度、子彈數(shù)目以及 CaCl2和亞精胺 (使子彈吸附在 DNA上 )的濃度等因素有關(guān)? 避開原生質(zhì)體再生植株的難關(guān)，單子葉植物基因轉(zhuǎn)移的有效途徑。 重組 DNA分子導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞 P148216。 磷酸鈣轉(zhuǎn)染法216。 DEAE－葡聚糖轉(zhuǎn)染法216。 聚陽(yáng)離子－ DMSO轉(zhuǎn)染法216。 脂質(zhì)體介導(dǎo)法病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染生化轉(zhuǎn)染物理轉(zhuǎn)染216。 病毒顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)法216。 顯微注射法216。 電穿孔法要點(diǎn)l 轉(zhuǎn)化？轉(zhuǎn)染？轉(zhuǎn)導(dǎo)？l 感受態(tài)細(xì)胞？大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞如何制備？ l Ca 2＋ 誘導(dǎo)大腸桿菌轉(zhuǎn)化和電擊轉(zhuǎn)化？l 植物基因工程中的農(nóng)桿菌介導(dǎo)法？植物基因工程中外源基因轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞的方法？動(dòng)物基因工程中外源基因轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞的方法？演講完畢，謝謝觀
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