基因工程：第七章酵母基因工程-資料下載頁
2025-09-30 15:11本頁面
【正文】 乙型肝炎表面抗原在內(nèi)的數(shù)種外源蛋白在該系統(tǒng)中獲 個(gè)拷貝，因此重組多型漢遜酵母的構(gòu)建也是采取整合的策略。 得成功表達(dá)。 F 利用重組 酵母生產(chǎn)乙肝疫苗 7 酵母基因工程 由 乙型肝炎病毒 （ HBV） 感染引起的急慢性乙型肝炎是一種嚴(yán)重 的傳染病，每年約有 200萬 病人死亡，并有 3億 人成為 HBV攜帶者，其 中相當(dāng)一部分人可能轉(zhuǎn)化為肝硬化或肝癌患者。目前對乙型肝炎病毒 還沒有一種有效的治療藥物，因此高純度乙型疫苗的生產(chǎn)對預(yù)防病毒 感染具有重大的社會(huì)效益，而利用重組酵母大規(guī)模生產(chǎn)乙型疫苗為其 廣泛應(yīng)用提供了可靠的保證。 F 利用重組 酵母生產(chǎn)乙肝疫苗 7 酵母基因工程 產(chǎn)乙肝表面抗原的重組釀酒酵母 乙型肝炎病毒的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 產(chǎn)乙肝表面抗原的重組巴斯德畢赤酵母 乙型肝炎病毒的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 乙肝病毒是一種蛋白包裹型的 雙鏈 DNA病毒 ，具有感染力的病毒 乙型肝炎病毒的結(jié)構(gòu) 顆粒呈 球面 狀，直徑為 42 nm， 基因組僅為 kb。 病毒顆粒的主要 結(jié)構(gòu)蛋白是病毒的 表面抗原 多肽（ HBsAg）或 S多肽，它具有糖基化 和非糖基化兩種形式。顆粒內(nèi)的蛋白成份包括 核心抗原 （ HBcAg ）、 除此之外，被乙肝病毒感染的人的肝臟還能合成并釋放大量的 22 病毒 DNA聚合酶 、 微量病毒蛋白 。 nm的 空殼亞病毒顆粒， 其免疫原性是未裝配的各種包裝蛋白組份的 1000倍 。包裝蛋白共有三種轉(zhuǎn)膜糖蛋白： S、 M、 L多肽 。 乙型肝炎病毒的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 乙型肝炎病毒的包裝蛋白編碼基因 ATG ATG ATG TAA 108 aa 55 aa 226 aa preS1 preS2 S S 多肽 226 aa M 多肽 281 aa L 多肽 399 aa 乙型肝炎病毒的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 乙肝病毒在體外細(xì)胞培養(yǎng)基中并不能繁殖，因此第一代的乙肝疫 傳統(tǒng)乙肝疫苗的制備 苗是從病毒攜帶者的肝細(xì)胞質(zhì)膜上提取出來的。雖然這種質(zhì)膜來源的 疫苗具有較高的免疫原性，但由于原材料的限制難以大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化。 產(chǎn)乙肝表面抗原的重組釀酒酵母 20世紀(jì) 80年代開始選擇釀酒酵母表達(dá)重組 HBsAg， 主要工作包括 將 S多肽的編碼置于 ADH1啟動(dòng)子控制下，轉(zhuǎn)化子能表達(dá)出具有免疫活 性的重組蛋白，它在細(xì)胞提取物中以球形脂蛋白顆粒的形式存在，平 均顆粒直徑為 22 nm， 其結(jié)構(gòu)和形態(tài)均與慢性乙肝病毒攜帶者血清中 的病毒顆粒相同。 目前，由釀酒酵母生產(chǎn)的重組 HBsAg顆粒已作為乙肝疫苗商品化 重組產(chǎn)物的最終產(chǎn)量可達(dá)細(xì)胞總蛋白量的 1%2%。 進(jìn)一步的研究表明， M多肽和 L多肽對 S型疫苗具有顯著的增效作 用，由三者（或兩者）構(gòu)成的復(fù)合型乙肝疫苗還可以誘導(dǎo)那些對 S抗 原缺乏響應(yīng)的人群的免疫反應(yīng)。 產(chǎn)乙肝表面抗原的重組巴斯德畢赤酵母 整合型重組巴斯德畢赤酵母的構(gòu)建 PARS2 Bgl II 5’ AOX1 HBsAg PHIS4 3’ AOX1 Bgl II pBSAG151 11 kb Bgl II 5’ AOX1 HBsAg PHIS4 3’ AOX1 his+的轉(zhuǎn)化子 重組分子 轉(zhuǎn)化 his的受體細(xì)胞 染色體 DNA 產(chǎn)乙肝表面抗原的重組巴斯德畢赤酵母 重組巴斯德畢赤酵母的性能 由于巴斯德畢赤酵母染色體 DNA上還擁有第二個(gè)乙醇氧化酶基因 AOX2， 所以整合型重組菌仍能在含有甲醇的培養(yǎng)基上生長。 重組菌首先在含有甘油的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待甘油耗盡后，加入甲 醇誘導(dǎo) HBsAg表達(dá)，最終 S蛋白的產(chǎn)量可達(dá)細(xì)胞可溶性蛋白總量的 3% 在大規(guī)模的生產(chǎn)過程中，巴斯德畢赤酵母工程菌在一個(gè) 240L的發(fā)酵罐 中培養(yǎng)，最終可獲得 90克 22nm的 HBsAg顆粒，足夠制成 900萬份 乙肝 疫苗。
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