【正文】 心機(jī)的使用； 等電點(diǎn)的調(diào)節(jié)直接影響得率，PH要調(diào)節(jié)準(zhǔn)確《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 13次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 卵磷脂的提取與鑒定實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求。，鞏固對(duì)卵磷脂組成結(jié)構(gòu)的認(rèn)識(shí)。教學(xué)重點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：掌握卵磷脂的提取和鑒定的原理難點(diǎn)：如何去除蛋黃中除卵磷脂外的雜質(zhì)得到較純的卵磷脂實(shí)驗(yàn)材料小燒杯；試管；研缽；漏斗；濾紙；雞蛋黃；紅色石蕊試紙；95%乙醇； 10%氫氧化鈉溶液；鉬酸銨試劑；丙酮；3%溴的四氯化碳溶液；硫酸氫鉀實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、 實(shí)驗(yàn)原理★：磷脂是生物體組織細(xì)胞的重要成分，主要存在于大豆等植物組織以及動(dòng)物的肝、腦、脾、心等組織中，尤其在蛋黃中含量較多(10%左右)。卵磷脂和腦磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此性質(zhì)可將其與中性脂肪分離開；此外，卵磷脂能溶于乙醇而腦磷脂不溶，利用此性質(zhì)又可將卵磷脂和腦磷脂分離。溶劑蛋白質(zhì)脂肪卵磷脂腦磷脂乙醇不溶溶溶不溶氯仿不溶溶溶溶丙酮不溶溶不溶不溶新提取的卵磷脂為白色，當(dāng)與空氣接觸后，其所含不飽和脂肪酸會(huì)被氧化而使卵磷脂呈黃褐色。卵磷脂被堿水解后可分解為脂肪酸鹽、甘油、膽堿和磷酸鹽。甘油與硫酸氫鉀共熱，可生成具有特殊臭味的丙烯醛；磷酸鹽在酸性條件下與鉬酸銨作用，生成黃色的磷鉬酸沉淀；膽堿在堿的進(jìn)一步作用下生成無色且具有氨和魚腥氣味的三甲胺。這樣通過對(duì)分解產(chǎn)物的檢驗(yàn)可以對(duì)卵磷脂進(jìn)行鑒定▲。二、實(shí)驗(yàn)步驟 稱取約10g煮熟雞蛋黃于研缽中，分3次加入30mL丙酮（每次10mL）充分研磨均勻，漏斗過濾，留濾渣，加入溫?zé)岬?5%乙醇30mL，邊加邊攪拌均勻，并靜置10min，冷卻后過濾得澄清透明黃色乙醇溶液。如濾液仍然混濁，可重新過濾直至完全透明。蒸發(fā)乙醇至干，得油膏狀黃色物質(zhì)，所得產(chǎn)物即為卵磷脂?！「稍镌嚬芤恢?，加入少量提取的卵磷脂以及2～5mL 氫氧化鈉溶液，放入水浴中加熱15min，在管口放一片紅色石蕊試紙，觀察顏色有無變化，并嗅其氣味。將加熱過的溶液過濾，濾液供下面檢驗(yàn)。取干凈試管一支，加入10滴上述濾液，再加入1～2滴3% 溴的四氯化碳溶液，振搖試管，觀察有何現(xiàn)象產(chǎn)生。取干凈試管一支，加入10滴上述濾液和5～10滴95%乙醇溶液，然后再加入5~10滴鉬酸銨試劑，觀察現(xiàn)象；最后將試管放入熱水浴中加熱5～10min，觀察有何變化?！「蓛粼嚬芤恢?， 硫酸氫鉀，用試管夾夾住并先在小火上略微加熱，使卵磷脂和硫酸氫鉀混熔，然后再集中加熱，待有水蒸氣放出時(shí)，嗅有何氣味產(chǎn)生。教學(xué)過程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 卵磷脂的生理作用提綱、板書設(shè)計(jì)原理及簡要操作步驟作業(yè)？？主要參考資料[1]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析講解原理時(shí)，讓學(xué)生了解卵磷脂的作用；丙酮研磨要徹底，得到的卵磷脂純度更高；檢驗(yàn)的過程要仔細(xì)觀察現(xiàn)象《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 14 次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 酵母RNA提取及鑒定 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求了解RNA的組分掌握鑒定RNA組分的方法教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：離心機(jī)的使用方法：實(shí)驗(yàn)中各試劑的用處難點(diǎn)：RNA的組分和鑒定方法實(shí)驗(yàn)材料（1）試劑：、酸性乙醇溶液、95%乙醇、濃硫酸、濃氨水、三氯化鐵濃鹽酸溶液、苔黑酚乙醇溶液、鉬酸銨溶液、抗壞血酸（2）器材：離心機(jī)、托盤天平、恒溫水浴鍋、錐形瓶、試管、試管架實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理★:（酵母片中酵母為休眠體，在溫度、。水分適宜時(shí)可復(fù)活。）%，~%。菌體容易收集，RNA也易分離。本法采用稀減法來提取變性的RNA。RNA溶于堿性溶液，加熱可使蛋白質(zhì)變性，將蛋白質(zhì)和核酸分離，同時(shí)RNA解聚。然后離心除去菌體等殘?jiān)?。在酵母的堿性提取液上清中加入酸性乙醇溶液使解聚的核糖核酸沉淀，利用離心技術(shù)收集RNA粗提物。后用硫酸水解RNA得核糖、磷酸和堿基組分，分別用定糖法、定磷法和嘌呤銀反應(yīng)鑒定。二、實(shí)驗(yàn)步驟： 用托盤天平稱2~3g干酵母于研缽中，加入20ml ，懸浮在沸水浴30min，冷卻。，與另一組同學(xué)的離心管在托盤天平上平衡，然后兩組的離心管對(duì)稱地放入離心機(jī)中，4000r/min下離心10min▲。，混勻。，平衡、離心（4000r/min）3min。，各離心管加入3mL 3mol/L硫酸，混勻，將水解液在沸水浴中加熱至少10min（使沉淀RNA充分水解）。，加入1mL水解液，再加入1mL濃氨水，觀察有無白色嘌呤堿的銀化合物沉淀。▲，（大約4滴），混勻，用試管夾夾好后放到沸水浴中5~10min，注意觀察溶液是否變成綠色，說明核糖的存在?！?，加入水解液1mL和定磷試劑1mL，混勻，在沸水浴中加熱，注意觀察溶液顏色的變化，溶液變藍(lán)，說明磷酸存在▲。注意事項(xiàng)：離心一定要平衡對(duì)稱放入離心機(jī)中，離心機(jī)達(dá)到設(shè)置轉(zhuǎn)速時(shí)才能離開。教學(xué)過程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) RNA的種類及組成成分提綱、板書設(shè)計(jì)原理及簡要操作步驟作業(yè)驗(yàn)證RNA中核糖的方法，可否用來檢驗(yàn)脫氧核糖，為什么？主要參考資料[1] 《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010總結(jié)分析 復(fù)習(xí)離心機(jī)的使用； 實(shí)驗(yàn)原理的講解要強(qiáng)調(diào)RNA的三種組分鑒定方法及現(xiàn)象《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 15 次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 花菜中核酸的分離實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求學(xué)習(xí)從植物組織中分離核酸的原理和操作方法。掌握根據(jù)物質(zhì)性質(zhì)設(shè)計(jì)分離方法教學(xué)重點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：離心機(jī)的使用及DNA分離難點(diǎn)：DNA的組分和鑒定方法實(shí)驗(yàn)材料試劑：新鮮菜花、95%乙醇、丙酮、5%高氯酸溶液、10%氯化鈉溶液、石英砂。器材：量筒、剪刀、研缽、恒溫水浴鍋、電爐、漏斗。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理★：，DNA含量豐富，并且材料無色，便于鑒定；，釋放出DNA；，而細(xì)胞中某些物質(zhì)溶于酒精，可以用酒精提取含雜質(zhì)較少的DNA；，和二苯胺試劑沸水浴條件下作用呈現(xiàn)藍(lán)色，因此二苯胺可作為鑒定DNA的試劑。二、實(shí)驗(yàn)步驟： 切取菜花表層約5g，放入研磨過濾器外套筒中，加入2ml研磨液，插入研磨桿，朝一個(gè)方向按壓旋轉(zhuǎn)研磨3min。 打開研磨桿上蓋，用移液器取研磨液 2ml，轉(zhuǎn)至試管中，緩慢沿試管閉加入4ml冰無水乙醇，輕輕轉(zhuǎn)試管，可看到白色絮狀物出現(xiàn)，即提取出的纏繞在一起的DNA。 ▲ a)溶解DNA：用玻璃棒挑出白色絮狀DNA轉(zhuǎn)移到另一試管中，加1ml 2 mol/L的Nacl溶液使DNA溶解以液體形式呈現(xiàn)，便于鑒定。b)設(shè)置對(duì)照組：另外一試管中加1ml 2 mol/L的Nacl溶液作為對(duì)照。并對(duì)兩只試管進(jìn)行標(biāo)記。 c)二苯胺水浴鑒定▲：兩只試管中各加1ml二苯胺試劑，在沸水浴中加熱10min，觀察顏色變化。三、實(shí)驗(yàn)分析▲ 加入白色絮狀物的試管中顏色變?yōu)樗{(lán)色，另一對(duì)照試管中沒有顏色變化，說明提取出了菜花中的DNA。教學(xué)過程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) DNA的種類及組成成分提綱、板書設(shè)計(jì)原理及簡要操作步驟作業(yè)本實(shí)驗(yàn)中為何用高氯酸溶液？主要參考資料[1] 《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010總結(jié)分析 實(shí)驗(yàn)原理要讓學(xué)生知道每一步的作用和方法； 鑒定的過程要與RNA鑒定做對(duì)比《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 16 次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 卵清蛋白分離及濃度測(cè)定實(shí)驗(yàn)性質(zhì)設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求能自行設(shè)計(jì)卵清蛋白分離及組分鑒定方法能較準(zhǔn)確測(cè)得蛋白質(zhì)濃度教學(xué)重點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：分離鑒定方法，濃度測(cè)定方法難點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)材料試劑：考馬斯亮藍(lán)溶液、卵清、乙醇、漂洗液。器材：電泳器材、分光光度計(jì)、離心機(jī)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理：利用沉淀法分離蛋白質(zhì)▲利用電泳法鑒定其組分▲利用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度▲二、實(shí)驗(yàn)步驟：自行設(shè)計(jì)教學(xué)過程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 實(shí)驗(yàn)完畢后各小組結(jié)果比較提綱、板書設(shè)計(jì)每個(gè)小組寫出簡要實(shí)驗(yàn)方案作業(yè) 比較各組實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分析自己的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)缺點(diǎn)主要參考資料[1] 《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010總結(jié)分析 讓學(xué)生了解不同分離測(cè)定方法； 考察學(xué)生設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)和操作能力