【文章內(nèi)容簡介】 （1）取試管3支，編號，按下表依次加入各種試劑。 pH對酶促反應(yīng)速度影響實(shí)驗(yàn)加樣表管號 1 2 3％淀粉液（mL） 2 2 2PH （mL） 3 — —PH （mL） — 3 —PH （mL） — — 3稀釋唾液酶（mL） 2 2 2（2）混勻后，將各管置于37℃水浴5分鐘后，取2號管中混合液1滴于點(diǎn)滴板上，加1滴KII2溶液顯色，以檢驗(yàn)淀粉的水解程度。若不是棕黃色，則繼續(xù)保溫，然后每隔1min繼續(xù)取2號管的混合液1滴于點(diǎn)滴板上，加1滴KII2溶液顯色，直至變成棕黃色時(shí)，向所有試管內(nèi)依次滴加2滴KII2溶液顯色。觀察各管顏色并解釋結(jié)果▲。（1）取試管4支，編號，按下表依次加入各種試劑。激活劑和抑制劑對酶促反應(yīng)速度影響實(shí)驗(yàn)加樣表管號 1 2 3 4％淀粉液（mL） 1％NaCl溶液（mL） 2 — — —1％Na2SO4溶液（mL） — 2 — —1％CUSO4溶液（mL） — — 2 —蒸餾水（mL） — — — 2稀釋唾液酶（mL） （2）混勻后，將各管置于37℃水浴8分鐘后，取1號管中混合液1滴于點(diǎn)滴板上，加1滴KII2溶液顯色，以檢驗(yàn)淀粉的水解程度。若不是棕黃色，則繼續(xù)保溫，然后每隔1min繼續(xù)取1號管的混合液1滴于點(diǎn)滴板上，加1滴KII2溶液顯色，直至變成棕黃色時(shí)，向所有試管依次滴加1滴KII2溶液顯色。觀察各管顏色并解釋結(jié)果▲。教學(xué)過程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 隨著淀粉水解，為什么與碘有顏色反應(yīng)變化？提綱、板書設(shè)計(jì) 原理及簡要操作步驟作業(yè) 1在作離子對酶活的影響時(shí)4號管有何作用？？？主要參考資料[1]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析對照實(shí)驗(yàn)要注意同步性；不同人的唾液淀粉酶活性不盡相同，讓學(xué)生注意到樣本差異；重點(diǎn)分析激活劑和抑制劑對酶促反應(yīng)速度的影響《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 7次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 Folin酚試劑法測蛋白質(zhì)濃度 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)綜合性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求1. 學(xué)習(xí)會(huì)用Folin酚試劑法測蛋白質(zhì)濃度的方法。2. 鞏固分光光度計(jì)的使用。教學(xué)重點(diǎn)與難點(diǎn) 重點(diǎn)：分光光度計(jì)的使用 難點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制實(shí)驗(yàn)材料試劑：標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，F(xiàn)olin酚試劑，樣品液蛋白質(zhì)器材：分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、試管、移液管實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理★Folin酚試劑法測蛋白質(zhì)濃度的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即Folin酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質(zhì)的靈敏度。這兩種顯色反應(yīng)產(chǎn)生深蘭色的原因是：在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復(fù)合物。Folin酚試劑中的磷鉬酸鹽磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產(chǎn)生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。在一定的條件下，蘭色深度與蛋白的量成正比。二、實(shí)驗(yàn)步驟▲：取16支大試管，1支作空白，3支留作未知樣品，其余試管分成兩組，分別加入0，，，（濃度為250mg/ml）。，然后每支試管加入5毫升試劑甲，在旋渦混合器上迅速混合，于室溫（20～25℃）放置 10分鐘。（Folin酚試劑），同樣立即混勻。這一步混合速度要快，否則會(huì)使顯色程度減弱。然后在室溫下放置30分鐘，以未加蛋白質(zhì)溶液的第一支試管作為空白對照，于700nm處測定各管中溶液的吸光度值。以蛋白質(zhì)的量為橫座標(biāo)，吸光度值為縱座標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。：取1毫升樣品溶液（其中約含蛋白質(zhì)20~250微克），按上述方法進(jìn)行操作，取1毫升蒸餾水代替樣品作為空白對照。通常樣品的測定也可與標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定放在一起，同時(shí)進(jìn)行。即在標(biāo)準(zhǔn)曲線測定的各試管后面，再增加3個(gè)試管。如上表中的10試管。根據(jù)所測樣品的吸光度值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的蛋白質(zhì)量，從而計(jì)算出樣品溶液的蛋白質(zhì)濃度▲。教學(xué)過程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 測定蛋白質(zhì)濃度其他方法有哪些？提綱、板書設(shè)計(jì)原理及簡要操作步驟作業(yè) 簡述Folin酚試劑法比較其他蛋白質(zhì)測定方法的優(yōu)點(diǎn)。主要參考資料[1] 《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010總結(jié)分析 強(qiáng)調(diào)Folin酚試劑法測蛋白質(zhì)濃度的顯色原理； 鞏固分光光度計(jì)的使用《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 8 次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：掌握醋酸纖維薄膜電泳的操作方法。難點(diǎn)：電泳技術(shù)的原理。實(shí)驗(yàn)材料器材：DYYⅢ6型常壓電泳儀、醋酸纖維薄膜（2 cm8cm）、.培養(yǎng)皿、蓋玻片、濾紙、鑷子。試劑：1． 巴比妥緩沖液（，）：，用蒸餾水定容至1000mL。2． 染色液：氨基黑10B ，用甲醇50mL、冰醋酸10mL、水40mL溶解（可重復(fù)使用）。3．漂洗液：甲醇或乙醇45mL，冰醋酸5mL，水50mL，混勻。4．透明液（僅在定量分析時(shí)使用）：無水乙醇7份，冰醋酸3份，混勻。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理★：電泳是帶電顆粒在電場作用下，向著與其電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。醋酸纖維薄膜電泳(CAME)是一種區(qū)帶電泳技術(shù)，將血清樣品點(diǎn)樣于醋纖膜上，在pH8．6的緩沖液中電泳時(shí)，血清蛋白質(zhì)均帶負(fù)電荷移向正極。由于血清中各蛋白組分等電點(diǎn)不同而致表面凈電荷量不等，加之分子大小和形狀各異，因而電泳遷移率不同，彼此得以分離。 影響電泳遷移率的外界因素：電場強(qiáng)度、溶液的pH值、溶液的離子強(qiáng)度和電滲現(xiàn)象。影響電泳遷移率的內(nèi)在因素：質(zhì)點(diǎn)所帶凈電荷的量、質(zhì)點(diǎn)的大小和形狀。本實(shí)驗(yàn)以醋酸纖維素為電泳支持物，它是纖維素的羥基乙酰化所形成的纖維素醋酸酯，將它溶于有機(jī)溶劑（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均勻的薄膜則成為醋酸纖維素薄膜。該膜具有均一的泡沫狀的結(jié)構(gòu)，厚度約為120 μm，有很強(qiáng)的通透性，對分子移動(dòng)阻力很小。醋酸纖維素薄膜電泳具有微量、快速、簡便、分辨力高，對樣品無拖尾和吸附現(xiàn)象等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)中用于電泳分離各種血清蛋白。血清中含有清蛋白、α球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白和各種脂蛋白等，各種蛋白質(zhì)在電場中的遷移速度不同。，染色后可顯示5條區(qū)帶。其中清蛋白的泳動(dòng)速度最快，其余依次為ααβ及γ球蛋白。二、實(shí)驗(yàn)步驟：1）預(yù)處理；2）點(diǎn)樣：3）電泳；4）染色；5）漂洗，吸干。：用鑷子取醋酸纖維薄膜2張，識別出光澤面與粗糙面，將粗糙面朝上放在電泳槽中的緩沖液中浸泡20min。 ：事先用點(diǎn)樣器在濾紙上點(diǎn)幾個(gè)樣，熟悉一下點(diǎn)樣器的用法。然后把膜條從緩沖液中取出，夾在兩層濾紙內(nèi)用手指快速捋一下，以吸干表面多余的液體，隨即將粗糙面朝上平鋪在玻璃板上。注意，切勿將膜條長時(shí)間放在濾紙上，以免膜條中的緩沖液過度吸出。用蓋玻片蘸一點(diǎn)血清，使血清均勻地分布在蓋玻片切面。將蓋玻片在膜條一端2~3cm處輕輕地垂直落下并隨即提起，這樣即在膜條上點(diǎn)上了細(xì)條狀的血清樣品，每張膜點(diǎn)一個(gè)樣。（要求：輕、勻、直、細(xì)）3．電泳：預(yù)先要在電泳槽內(nèi)加入緩沖液，使兩個(gè)電極槽內(nèi)的液面等高，做好濾紙橋。用鑷子將膜條平懸于電泳槽支架的濾紙橋上，要平直。膜條光面朝上，點(diǎn)樣端靠近負(fù)極、且懸空（可用鑷子再將膜條兩端壓服帖一些）。蓋嚴(yán)電泳室，檢查一下電泳槽和穩(wěn)壓電源是否已經(jīng)連接好。通電，調(diào)節(jié)電壓至110V，電泳時(shí)間約為30min。4．染色：電泳完畢后，關(guān)上電源開關(guān)，用鑷子將薄膜條取下并放在裝有染色液的培養(yǎng)皿中浸泡3~4min（注意蓋好培養(yǎng)皿的蓋子，以免溶劑揮發(fā)）。5．漂洗：將膜條從染色液中取出，在培養(yǎng)皿的邊緣上瀝去表面多余的染色液，依次放入裝有漂洗液的培養(yǎng)皿（共有2套）中漂洗2次（未漂洗時(shí)注意蓋好培養(yǎng)皿的蓋子，以免溶劑揮發(fā)），