【正文】 至色帶清晰的電泳圖譜。三、分析結果▲：實驗采用小牛血清故出現(xiàn)三條色帶：清蛋白；α1球蛋白；α2球蛋白，且清蛋白顏色最深。（本實驗由于時間有限，授課時間安排首先由教師簡單講解實驗步驟并向?qū)W生演示操作方法后指導學生操作，在電泳的30min里教師給學生詳盡講解實驗原理，操作步驟及其注意事項。）教學過程中師生活動設計 蛋白質(zhì)顆粒為什么能電泳？依據(jù)什么性質(zhì)？提綱、板書設計原理及簡要操作步驟作業(yè)，醋酸纖維薄膜點樣的一端應靠近哪一極？為什么？？主要參考資料[1] 《生物化學實驗》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學實驗》，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，2010總結分析需要強調(diào)點樣方法，避免點樣過多，重復點樣等；重點講解遷移速率的因素；結合血清電泳在醫(yī)學檢驗領域的應用，便于學生更好的理解《醫(yī)學生物化學實驗》教案 第 9次課 2學時實驗項目 血清ALT活性測定 實驗性質(zhì)綜合性實驗 教學目的和要求掌握血清谷丙轉氨酶活性測定的基本原理、具體操作方法了解其臨床意義。教學重 點與難點重點：血清谷丙轉氨酶活性測定的原理。難點：血清谷丙轉氨酶活性測定的方法。實驗材料試劑：、1mol/L氫氧化鈉溶液、ALT底物液、2，4二硝基苯肼溶液、丙酮酸標準液。材料：分光光度計、恒溫水浴鍋、試管、移液管、容量瓶、量筒。實驗內(nèi)容一、實驗原理★：丙酮酸可與2，4二硝基苯肼在酸性溶液中反應形成相應的2，4二硝基苯腙，呈黃色，后者在堿性條件下呈紅棕色。通過測定其在520nm波長處的光吸收來了解丙酮酸的生成量，借此測定血清ALT的活力，故該類方法又稱比色測定法。該法雖然也有缺點，但操作簡便，不需要特殊儀器和試劑，故在臨床上被廣泛應用?！镌摲ǖ膯挝欢x是：，37℃保溫條件下與底物作用30分鐘。人血清的丙氨酸氨基轉移酶正常值為2~40U。二、實驗步驟：試劑測定管（1）測定對照管（2）標準管（3）標準對照管（4）ALT底物（mL）37度保溫5min（預熱，可略）血清（mL）丙酮酸標液（200ug/ml)磷酸buffer（mL）混勻，37度保溫30min2,4二硝基苯肼（mL）混勻，37度保溫20minALT底物（mL）（mL）▲以dH2O為空白對照測四管的A值▲公式：教學過程中師生活動設計 什么是酶的比活力？提綱、板書設計原理及簡要操作步驟作業(yè) 混浴各管后，為何要在10min后，30min內(nèi)測其吸光值？主要參考資料[1] 《生物化學實驗》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學實驗》，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，2010總結分析 原理講解要結合血清ALT活性測定在醫(yī)學檢驗領域的應用； 整個實驗過程中加樣和操作過程需規(guī)范，否則數(shù)據(jù)差距較大； 幫助學生推導酶活性的計算公式《醫(yī)學生物化學實驗》教案 第 10次課 2學時實驗項目 維生素C含量測定實驗性質(zhì)基礎性實驗 教學目的和要求學習測定VC含量的原理和方法掌握微量滴定管使用方法教學重 點與難點重點：滴定操作難點：計算方法實驗材料①試劑：辣椒勻漿（樣品VC）、標準VC，2，6二氯酚靛酚溶液。②器材：容量瓶，微量滴定管、小三角瓶、1℅草酸、2℅草酸、移液管。實驗內(nèi)容一、實驗原理★：氧化型2，6二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉紅色，在中性或堿性溶液中呈藍色，還原型2，6二氯酚靛酚無色。當用此染料滴定含有Vc的酸性溶液時，在Vc未全部氧化前，滴下的染料立即被還原成無色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化時，則滴下的染料立即使溶液顯示粉紅色，此時即為滴定終點，表示溶液中的Vc剛剛被氧化完全。因此，從滴定時2，6一二氯酚靛酚標準液的消耗量，可以計算出被檢物質(zhì)中Vc的含量。二、實驗步驟：1．辣椒勻漿的稀釋取辣椒勻漿7mL（），裝入小容量瓶，用2℅草酸稀釋定容至50mL刻度線。2．標準VC的滴定 吸取標準VC（），加9mL 1℅草酸混勻，用裝有2，6二氯酚靛酚的微量滴定管滴定至淡紅色（保持5s不褪去）為終點，記下所用體積V標3．樣品VC的滴定 從1中取10mL，放入錐形瓶，用2，6二氯酚靛酚滴定，方法同上，作兩次平行實驗。取消耗體積的平均值，記下體積V樣三、樣品VC濃度的計算▲：經(jīng)草酸稀釋后的辣椒勻漿中VC濃度為：每100g純辣椒中含VC的mg數(shù)為：注意：整個實驗要迅速，以防VC氧化。教學過程中師生活動設計 VC作用及缺乏癥提綱、板書設計原理及簡要操作步驟作業(yè) 本實驗中為何用草酸稀釋VC，而不用純水？主要參考資料[1]《生物化學實驗》，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，2010[2]《生物化學實驗教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學出版社，2010總結分析滴定前要提醒檢查滴定管的氣密性，裝溶液后還要排氣泡，微量滴定管需正確使用；結果計算較復雜，幫助推導和理解《醫(yī)學生物化學實驗》教案 第 11次課 2學時實驗項目 血清膽固醇的測定實驗性質(zhì)設計性實驗 教學目的和要求教學重 點與難點重點：血清中膽固醇測定的原理難點：膽固醇測定方法實驗材料儀器：離心機、離心管、試管、刻度吸量管、722型分光光度計。試劑：10%三氯化鐵溶液、磷硫鐵試劑、膽固醇標準儲存液、膽固醇標準溶液實驗內(nèi)容一、實驗原理★： 本實驗采用化學比色法測定總膽固醇（包括游離型膽固醇和膽固醇酯）。血清經(jīng)無水乙醇處理后，蛋白質(zhì)沉淀出來，膽固醇則溶于其中。在乙醇提取液中加磷硫鐵試劑、膽固醇試劑產(chǎn)生紫紅色化合物，顏色深淺與膽固醇總量成正比，可用分光光度計法測定。二、實驗步驟：（1）， mL，搖勻，10 min后離心（3000r/min 5 min），取上清備用。（2）取3支干燥試管，編號， mL（空白管）、 mL（標準管）、 mL(樣品管)， mL，搖勻，10 cm比色皿愉，用722型分光光度計在560 nm波長下比色。三、結果計算▲： 血清膽固醇含量（mg/mL）=A2/A1**2式中： A1為標準溶液的吸光度；A2為樣品液的吸光度 mmol/L教學過程中師生活動設計思考人體內(nèi)膽固醇的生理作用及正常含量提綱、板書設計原理及簡要操作步驟作業(yè) 主要參考資料[1]《生物化學實驗》，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，2010[2]《生物化學實驗教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學出版社，2010總結分析重點講解血清膽固醇的測定原理；再次復習分光光度計使用要熟練《醫(yī)學生物化學實驗》教案 第 12次課 2學時實驗項目 牛奶中提取酪蛋白實驗性質(zhì)基礎性實驗 教學目的和要求。教學重點與難點重點：從牛奶中制取酪蛋白的原理難點：加乙醇和水的目的實驗材料鮮牛奶、恒溫水浴鍋、臺式離心機、抽濾裝置。試劑：95%乙醇；無水乙醚；實驗內(nèi)容一、實驗原理★：牛乳中的主要蛋白質(zhì)是酪蛋白。酪蛋白是含磷蛋白質(zhì)的混合物，~，不溶于水、醇、有機溶劑。利用等電點時溶解度最低的原理，酪蛋白就沉淀出來。用乙醇洗滌沉淀物，除去脂質(zhì)雜質(zhì)后便可得到純的酪蛋白。二、實驗步驟：，在水浴中加熱至40℃，在攪拌下漫漫加入預熱至40℃（應注意兩種液體都應先預熱至40℃再用），(用1%NaOH或10%醋酸溶液進行調(diào)整)。觀察牛奶開始有絮狀沉淀出現(xiàn)后，保溫一定時間使沉淀完全。將上述懸浮液冷卻至室溫。離心分離8min（8000r/min）或15min（2000r/min），棄去上清液，得到酪蛋白粗制品；（洗滌時將沉淀顆粒用干凈吸管吹開或用毛細管的封閉一端攪開，充分洗滌），離心5min（12000r/min）或10min（3000r/min），棄去上清液；%的乙醇，攪拌片刻；，烘干，得酪蛋白精制品；（g）。 實驗結果與計算▲：計算含量和得率：酪蛋白含量（g/mL）=酪蛋白（g）/50mL100%；得率=測得含量/理論含量100%。教學過程中師生活動設計 牛奶中蛋白質(zhì)成份，牛奶的營養(yǎng)提綱、板書設計原理及簡要操作步驟作業(yè)設計另一種方法提取蛋白的方法。主要參考資料[1]《生物化學實驗》，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，2010[2]《生物化學實驗教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學出版社，2010課后自我總結分析 學習離