【正文】 點與難點重點：滴定操作難點：計算方法實驗材料①試劑：辣椒勻漿（樣品VC）、標(biāo)準(zhǔn)VC，2，6二氯酚靛酚溶液?！镌摲ǖ膯挝欢x是：，37℃保溫條件下與底物作用30分鐘。通過測定其在520nm波長處的光吸收來了解丙酮酸的生成量，借此測定血清ALT的活力，故該類方法又稱比色測定法。材料：分光光度計、恒溫水浴鍋、試管、移液管、容量瓶、量筒。難點：血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的方法。）教學(xué)過程中師生活動設(shè)計 蛋白質(zhì)顆粒為什么能電泳？依據(jù)什么性質(zhì)？提綱、板書設(shè)計原理及簡要操作步驟作業(yè)，醋酸纖維薄膜點樣的一端應(yīng)靠近哪一極？為什么？？主要參考資料[1] 《生物化學(xué)實驗》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實驗》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010總結(jié)分析需要強調(diào)點樣方法，避免點樣過多，重復(fù)點樣等；重點講解遷移速率的因素；結(jié)合血清電泳在醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用，便于學(xué)生更好的理解《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實驗》教案 第 9次課 2學(xué)時實驗項目 血清ALT活性測定 實驗性質(zhì)綜合性實驗 教學(xué)目的和要求掌握血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的基本原理、具體操作方法了解其臨床意義。三、分析結(jié)果▲：實驗采用小牛血清故出現(xiàn)三條色帶：清蛋白；α1球蛋白；α2球蛋白，且清蛋白顏色最深。4．染色：電泳完畢后，關(guān)上電源開關(guān)，用鑷子將薄膜條取下并放在裝有染色液的培養(yǎng)皿中浸泡3~4min（注意蓋好培養(yǎng)皿的蓋子，以免溶劑揮發(fā)）。蓋嚴(yán)電泳室，檢查一下電泳槽和穩(wěn)壓電源是否已經(jīng)連接好。用鑷子將膜條平懸于電泳槽支架的濾紙橋上，要平直。將蓋玻片在膜條一端2~3cm處輕輕地垂直落下并隨即提起，這樣即在膜條上點上了細(xì)條狀的血清樣品，每張膜點一個樣。注意，切勿將膜條長時間放在濾紙上，以免膜條中的緩沖液過度吸出。 ：事先用點樣器在濾紙上點幾個樣，熟悉一下點樣器的用法。二、實驗步驟：1）預(yù)處理；2）點樣：3）電泳；4）染色；5）漂洗，吸干。染色后可顯示5條區(qū)帶。本實驗中用于電泳分離各種血清蛋白。該膜具有均一的泡沫狀的結(jié)構(gòu)，厚度約為120 μm，有很強的通透性，對分子移動阻力很小。影響電泳遷移率的內(nèi)在因素：質(zhì)點所帶凈電荷的量、質(zhì)點的大小和形狀。由于血清中各蛋白組分等電點不同而致表面凈電荷量不等，加之分子大小和形狀各異，因而電泳遷移率不同，彼此得以分離。實驗內(nèi)容一、實驗原理★：電泳是帶電顆粒在電場作用下，向著與其電性相反的電極移動的現(xiàn)象。3．漂洗液：甲醇或乙醇45mL，冰醋酸5mL，水50mL，混勻。試劑：1． 巴比妥緩沖液（，）：，用蒸餾水定容至1000mL。難點：電泳技術(shù)的原理。教學(xué)過程中師生活動設(shè)計 測定蛋白質(zhì)濃度其他方法有哪些？提綱、板書設(shè)計原理及簡要操作步驟作業(yè) 簡述Folin酚試劑法比較其他蛋白質(zhì)測定方法的優(yōu)點。如上表中的10試管。通常樣品的測定也可與標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定放在一起，同時進(jìn)行。以蛋白質(zhì)的量為橫座標(biāo)，吸光度值為縱座標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。這一步混合速度要快，否則會使顯色程度減弱。然后每支試管加入5毫升試劑甲，在旋渦混合器上迅速混合，于室溫（20～25℃）放置 10分鐘。在一定的條件下，蘭色深度與蛋白的量成正比。這兩種顯色反應(yīng)產(chǎn)生深蘭色的原因是：在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復(fù)合物。2. 鞏固分光光度計的使用。觀察各管顏色并解釋結(jié)果▲。激活劑和抑制劑對酶促反應(yīng)速度影響實驗加樣表管號 1 2 3 4％淀粉液（mL） 1％NaCl溶液（mL） 2 — — —1％Na2SO4溶液（mL） — 2 — —1％CUSO4溶液（mL） — — 2 —蒸餾水（mL） — — — 2稀釋唾液酶（mL） （2）混勻后，將各管置于37℃水浴8分鐘后，取1號管中混合液1滴于點滴板上，加1滴KII2溶液顯色，以檢驗淀粉的水解程度。觀察各管顏色并解釋結(jié)果▲。 pH對酶促反應(yīng)速度影響實驗加樣表管號 1 2 3％淀粉液（mL） 2 2 2PH （mL） 3 — —PH （mL） — 3 —PH （mL） — — 3稀釋唾液酶（mL） 2 2 2（2）混勻后，將各管置于37℃水浴5分鐘后，取2號管中混合液1滴于點滴板上，加1滴KII2溶液顯色，以檢驗淀粉的水解程度。 （1）取試管3支，編號，各管按下表依次加入各種試劑。例如Cu2+是唾液淀粉酶的抑制劑。例如Cl是唾液淀粉酶的激活劑。不同的酶最適pH值不盡相同。因為酶本身是蛋白質(zhì)，pH不僅影響酶蛋白分子某些基團的解離，也影響底物的解離程度，從而影響酶與底物的結(jié)合。人體內(nèi)大多數(shù)酶的最適溫度在37℃左右。在某一溫度時反應(yīng)速度達(dá)到最大值，此溫度稱酶作用的最適溫度。實驗內(nèi)容一、實驗原理★：溫度與酶促反應(yīng)速度關(guān)系密切。實驗材料儀器：水浴鍋、電爐、白瓷板、試管、量筒、漏斗、脫脂棉。教學(xué)重 點與難點重點：唾液淀粉酶催化的酶促反應(yīng)；淀粉水解程度的判斷。（2）鑒定混合糖中糖的種類，并繪出層析圖譜。3．顯色 除盡溶劑后，向薄層板上噴霧糖顯色劑，于80℃下烘干10min，則各種糖分別顯出不同的顏色。點樣完畢，立即用電熱吹風(fēng)機吹干樣點。二、實驗步驟▲：1．點樣 選取制備好的薄板一塊， 的直線上均勻選4個點。薄層層析與其他方法比有明顯的優(yōu)點：層析時間短、樣品用量范圍大()、觀察結(jié)果方便、可以分離多種化合物等，其靈敏度比紙層析高10100倍，顯色方法甚至可以用腐蝕性顯色劑。吸附力主要與糖的相對分子質(zhì)量和羥基數(shù)有關(guān)，一般為三糖〉二糖〉單糖，醛糖〉酮糖〉脫氧糖。硅膠、氧化鋁和聚酰胺是廣泛采用的吸附劑，在吸附劑或支持劑中添加合適的粘合劑后再涂布，可使薄層緊貼在玻璃板上。實驗材料四種糖樣品、染色液、擴展劑、層析缸、層析板等實驗內(nèi)容一、實驗原理★：薄層層析(簡稱TLC)是在吸附層析基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種微量而快速的層析法，它是在吸附劑或支持劑均勻涂布的薄層上進(jìn)行的，故稱薄層層析。教學(xué)重 點與難點重點：掌握薄層層析的吸附原理。教學(xué)過程中師生活動設(shè)計 含苯環(huán)的氨基酸有哪些？雙縮脲反應(yīng)顏色與什么相關(guān)？提綱、板書設(shè)計 原理及簡要操作步驟作業(yè) ？？主要參考資料[1]《生物化學(xué)實驗》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實驗教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析 實驗過程中讓學(xué)生重點觀察顏色變化的過程； 醋酸鉛反應(yīng)的每一步都要記錄現(xiàn)象《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實驗》教案 第 5次課 2學(xué)時實驗項目 糖的薄層層析 實驗性質(zhì)基礎(chǔ)性實驗 教學(xué)目的和要求。雞蛋清溶液（蛋清:水=1:9）管號123456材料雞蛋清液指甲頭發(fā)%苯酚%色氨酸%酪氨酸（滴）4少許少許444濃硝酸（滴）22020444現(xiàn)象逐滴加10% NaOH后現(xiàn)象變化%醋酸鉛1mL、10%NaOH1mL、卵清蛋白1mL三樣試劑混勻加熱，觀察現(xiàn)象。觀察現(xiàn)象，記錄。實驗材料試劑：%醋酸鉛1mL、10%NaOH、1%CuSO4器具：水浴鍋、溫度計、200mL錐形瓶、100mL容量瓶、吸管、試管及試管架 實驗內(nèi)容一、實驗原理★：(biuret reaction) 蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)，雙縮脲反應(yīng)可用來檢測蛋白質(zhì)水解程度。教學(xué)重 點與難點重點：蛋白質(zhì)與氨基酸的顯色反應(yīng)原理。教學(xué)過程中師生活動設(shè)計 蛋白質(zhì)沉淀原理，什么是蛋白質(zhì)變性？根據(jù)