【正文】 略有不同。要使用與樣品相同的溶劑調(diào)儀器的零點(diǎn)，～，以保證讀數(shù)的可靠性。四、注意事項(xiàng)，必須是純凈(即無顯著的蛋白質(zhì)、酚、瓊脂糖或其他核酸、核苷酸等污染物)的制品。根據(jù)上述核酸的吸收系數(shù)，計(jì)算出樣品液中核酸的濃度。所以測出核酸溶液的A　260值后，即可據(jù)此計(jì)算出它的濃度。核酸的這一物理特性為測定核酸溶液的濃度提供了基礎(chǔ)。8. 95%乙醇9. 器材 超低溫冰箱，生物安全柜，電熱恒溫水槽，臺式高速冷凍離心機(jī)實(shí)驗(yàn)六 紫外分光光度法定量檢測DNA與RNA 一、原理具有共軛雙鍵的有機(jī)分子，對紫外光有強(qiáng)烈的吸收，核酸分子中的堿基就有共軛雙鍵，因此也強(qiáng)烈吸收紫外光。6. mol/L醋酸緩沖液(pH　): mol/L醋酸鈉35 ml， mol/L醋酸15 ml，加蒸餾水稀釋至1 000 ml。4. 氯仿異戊醇: 氯仿24份與異戊醇1份混合。2. 250 g/L SDS: 稱取十二烷基硫酸鈉25 g，溶于50%乙醇中至100 ml，室溫存放。，操作時(shí)應(yīng)小心，若沾灑在皮膚上立即用水或用70%酒精棉球擦洗。三、注意事項(xiàng)，有條件應(yīng)在0～4℃進(jìn)行。離心管倒置濾紙片上，盡量使液體流干。，3 000 r/min，10 min。，加入1/10體積的2 mol/L醋酸鈉，混勻。，3 000 r/min，10～15 min，上層為稍混濁含有RNA的水相，中層為變性蛋白質(zhì)，下層為酚液，管底殘?jiān)蠨NA。3.移入三角燒瓶內(nèi)，置65℃水浴中繼續(xù)振搖5～8 min。立即剖腹，取出其肝臟，浸于預(yù)冷至0℃ mol/L醋酸鈉緩沖液()中，剝?nèi)ジ伍T處的結(jié)締組織，洗去血液，用濾紙將水分吸干，　g。 ml mol/L　NaCl溶液中留作定量、電泳用。氯仿層液體不要廢棄，可倒入收集瓶內(nèi)，以便蒸餾回收再用。上層為水液，下層為氯仿，變性蛋白質(zhì)在氯仿與水層的界面上。，加等容積的氯仿異戊醇8 ml，劇烈振搖10 min。吸棄上層液體， mol/L mol/L　EDTA液混勻，離心洗滌之(如欲獲取摻雜RNA較少的純DNA時(shí)，此步離心洗滌應(yīng)重復(fù)多次)。，轉(zhuǎn)入玻璃勻漿器中， mol/L mol/L EDTA液7 ml，旋轉(zhuǎn)上下勻漿，至絕大部分細(xì)胞破碎為止。二、操作(一)DNA的提純，放血處死。組織勻漿在酚與十二烷基硫酸鈉存在下，RNA與蛋白質(zhì)分離。實(shí)驗(yàn)五 組織DNA與RNA的分離和提純一、原理脫氧核糖核蛋白(DNP) mol/L NaCl中溶解度很低，而核糖核蛋白(RNP)卻較易溶解， mol/L NaCl洗滌組織勻漿，可得到DNP，再用氯仿異戊醇除蛋白即可得到DNA。臨床意義血糖超過正常最高值，稱為高血糖癥，常由糖尿病、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、腦垂體前葉機(jī)能亢進(jìn)、腎上腺皮質(zhì)和髓質(zhì)機(jī)能亢進(jìn)等疾病引起。⑵ 計(jì)算回收量：回收量（mmol/L）=回收管葡萄糖含量（mmol/L）—測定管葡萄糖含量（mmol/L）⑶ 計(jì)算回收率：注：。從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出血漿或血清的葡萄糖含量，并與計(jì)算結(jié)果作比較。計(jì)算及作圖選擇與測定管接近的標(biāo)準(zhǔn)管的光密度值，列出計(jì)算公式，計(jì)算出血漿（或血清）中葡萄糖的含量（mmol/L）。取出，用流水或冷水浴冷卻。5%即較為理想。在待測樣品中加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，在按樣品測定的條件和方法進(jìn)行測定，然后計(jì)算測出標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量占加入標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量的百分率，這種試驗(yàn)即回收試驗(yàn)，算出的百分率即回收率。（3）作為工作曲線，在大量進(jìn)行樣品中測定物含量分析時(shí)，通常用作計(jì)算的基礎(chǔ)，即從曲線上可直接找到測定液的光密度所相當(dāng)?shù)臐舛?。制作?biāo)準(zhǔn)曲線的意義在于：（1）作為校正曲線，從濃度—光密度的直線特性，可判斷某方法中化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的顏色物質(zhì)是否符合或遵守朗伯特—比爾定律。冷后盛于試劑瓶中。⑶ 葡萄糖應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液()：，置100ml容量瓶內(nèi)，以飽和苯甲酸溶液稀釋100ml刻度。以飽和苯甲酸溶液溶解并轉(zhuǎn)移入100ml容量瓶內(nèi)，再以飽和苯甲酸溶液稀釋至100ml刻度。R或C將此溶液轉(zhuǎn)移入1L容量瓶內(nèi)，加鄰甲苯胺150ml，%硼酸溶液100ml，再加冰醋酸至1L刻度，置棕色瓶中，至少可應(yīng)用兩個(gè)月。R），溶于冰醋酸（A原理葡萄糖在熱醋酸溶液中與鄰甲苯胺縮合生成蘭綠色西夫氏堿（Schiff base），其顏色的深淺與葡萄糖含量成正比。顯色：%的茚三酮溶液，再用電吹風(fēng)吹干，此時(shí)可見紫紅色同心圓弧色斑出現(xiàn)。這時(shí)可見層析溶劑沿?zé)粜旧仙綖V紙上，再向四周擴(kuò)散。另取同樣濾紙一小片（約12 cm2），下一半用剪刀剪成須狀，卷成圓筒如燈芯，插入小孔中固定（勿突出濾紙平面）。注意點(diǎn)樣斑點(diǎn)不可太大（～）。層析：取直徑12cm的圓形層析濾紙一張，用圓規(guī)作半徑1cm的同心圓，通過圓心作兩條垂線，用鉛筆在交點(diǎn)處輕輕作一點(diǎn)樣記號（見圖）。保溫完畢，立即將測定管在火焰上加熱煮沸2分鐘終止反應(yīng)。（ml）（ml）（ml）237℃預(yù)熱2分鐘2沸水浴5分鐘器材⑴ 瓷研缽⑵ 小試管二支⑶ 刻度吸管⑷ 層析濾紙⑸ 毛細(xì)吸管⑹ 培養(yǎng)皿，小表面皿⑺ 電吹風(fēng)⑻ 剪刀、鑷子⑼ 圓規(guī)、直尺、鉛筆（學(xué)生自備）操作肝勻漿的制備：稱取新鮮的兔子肝臟1克，在研缽中用剪刀盡量剪碎，將肝組織研磨制成勻漿，再加入8ml 上述磷酸緩沖液，混勻。⑶ ：⑷ ：，以1mol/L ，用磷酸緩沖液加至50ml。試劑和器材試劑⑴ ：，蒸餾水稀釋20倍。每種轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)均由專一的轉(zhuǎn)氨酶催化。轉(zhuǎn)氨基作用是氨基酸代謝的一個(gè)重要反應(yīng)。如欲做定量測定，可把色斑剪下，溶于適當(dāng)?shù)娜芤褐杏跇?biāo)準(zhǔn)比色，也可直接在紙上用光密度計(jì)讀數(shù)。氨基酸一般為無色物質(zhì)，所以通常在層析結(jié)束后，用茚三酮使之顯色。因此，極性基團(tuán)較多的氨基酸（如二羧基氨基酸）或極性基在整個(gè)分子中占比例較大的氨基酸和水的親和力大，移動較慢，非極性基（如烴基、芳香基）所占比例較大的則和酚、丁醇等的親和力大，移動也較快。決定各氨基酸在兩相溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)的是氨基酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)。 各種氨基酸在一定的溶劑、一定的紙質(zhì)及其他有關(guān)條件（濕度、PH等）固定情況下，各有其特有的，不變的Rf值。反之，分配在固定相內(nèi)趨勢較小的成分移行就遠(yuǎn)，色斑位置離原點(diǎn)也遠(yuǎn)。層析結(jié)束時(shí)，用顯色劑使被分離的物質(zhì)顯出顏色，成為一個(gè)個(gè)色斑。另一種和固定相不能混合或部分混合的溶劑則為“移動相”。待分析混合物的各組分以不同的速度移動，從而分離。所謂“相”是指一個(gè)系統(tǒng)中的某一均勻部分。實(shí)驗(yàn)三 氨基酸的紙上層析與氨基酸移換作用原理層析分離技術(shù)是一種物理的分離法。各管由顯色到比色的時(shí)間應(yīng)盡可能一致。（2）須于顯色后30min內(nèi)比色測定。6號管從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待測樣品蛋白質(zhì)含量，即為樣品液的蛋白質(zhì)含量（mg/ml）。以0管調(diào)零，在540nm波長處將各管溶液進(jìn)行比色，讀取各管光密度值（重復(fù)三次）。蛋白濃度/(mg/ml)操作方法取7只試管，按下表加入試劑：三、器材試管，試管架，恒溫水浴，721型分光光度計(jì)。測試其他蛋白質(zhì)樣品應(yīng)稀釋適當(dāng)倍數(shù)，使其濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線測試范圍內(nèi)。作為標(biāo)準(zhǔn)用的蛋白質(zhì)要預(yù)先用微量克氏定氮法測定蛋白質(zhì)含量，根據(jù)其純度稱量，配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液。保存于塑料試劑瓶中或內(nèi)壁涂一層純凈石蠟的普通試劑瓶中。4H2O， A．R．或C．P．)，分別用蒸餾水約250ml溶解后，全部轉(zhuǎn)移于1L容量瓶中，混和，再加入10％氫氧化鈉溶液300ml，隨加隨搖勻。一、試劑 雙縮脲試劑：稱取硫酸銅(CuSO4紫紅色銅雙縮脲復(fù)合物分子結(jié)構(gòu)為：但在體液中，除蛋白質(zhì)外實(shí)際上不存在可與雙縮脲試劑顯色的物質(zhì)。蛋白質(zhì)分子內(nèi)含有許多肽鍵(—CONH—)，因此可用雙縮脲法作比色測定。實(shí)驗(yàn)二 血清總蛋白的含量測定原理本法所用試劑因能與雙縮脲(H2NOC－NHCONH2)產(chǎn)生紫紅色反應(yīng)而被稱為雙縮脲試劑。（3）待