【正文】 一個(gè)常數(shù)？它與哪些因素有關(guān)？這種性質(zhì)對(duì)于選擇測(cè)定酶活力的條件有什么意義？ 3. 酶反應(yīng)的抑制作用有哪些類型？各根據(jù)什么劃分的？它們各有什么特點(diǎn)？ 實(shí)驗(yàn)八 維生素 C的定量測(cè)定 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 1. 學(xué)習(xí)維生素 C定量測(cè)定法的原理和方法。 【 注意事項(xiàng) 】 沸水浴中的試管在加入碘液之前一定要在自來(lái)水下冷卻。冷后，各滴入 2一 3滴碘溶液，混勻。再向每支試管各加入 %淀粉溶液 3毫升和稀釋的唾液 l毫升。 3. 抑制劑和激活劑對(duì)酶活性的影響 取 3支試管，編號(hào)。搖勻， 20分鐘后取出 3支試管，各加碘溶液 2滴，混勻，比較各管溶液的顏色。） 2. 溫度對(duì)酶活性的影響 取 3支試管，編號(hào)后各加入淀粉溶液 2毫升。作為唾液淀粉酶的樣品液。 【 實(shí)驗(yàn)試劑與器材 】 試劑 %淀粉溶液 % NaCl溶液 % CuSO4溶液 碘液 儀器：恒溫水浴鍋 【 實(shí)驗(yàn)步驟 】 1. 唾液淀粉酶的制備 (1) 提?。簩?shí)驗(yàn)者先用水漱口清潔口腔，然后含一小口（約 5mL）蒸餾水于口中輕嗽一、二分鐘。直鏈淀粉（即可溶性淀粉）遇碘呈藍(lán)色；糊精按分子從大到小的順序，遇碘可呈藍(lán)色、紫色、暗褐色和紅色，最小的糊精和麥芽糖遇碘不顯顏色。唾液內(nèi)的淀粉酶可將淀粉逐步水解成各種不同大小的糊精分子，最終產(chǎn)物為麥芽糖和少量的葡萄糖。通過(guò)本次的實(shí)驗(yàn)觀察，同學(xué)們應(yīng)該更加深刻的理解理論課上所講的酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的內(nèi)容。 管號(hào) 試劑 對(duì)照 樣品 醋酸 /ml 血清 /ml 鄰苯二甲醛試劑 /ml 0 無(wú)水乙醇 /ml 0 混合酸 /ml 實(shí)驗(yàn)七 唾液淀粉酶活性的觀察 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 酶是化學(xué)本質(zhì)為蛋白質(zhì)的生物催化劑。 顯色時(shí)要避免高溫，采用混合酸液反應(yīng)時(shí)溫度不會(huì)升得太高，一般在 4~32℃ 時(shí)，顏色能穩(wěn)定 2h。 加畢，混勻，靜置 10min，以 550nm波長(zhǎng)比色測(cè)定，以吸光度值為縱坐標(biāo)，膽固醇含量為橫坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。 100ml樣品中膽固醇含量在400mg之內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。 【 思考題 】 1．移液管使用時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題 ? 2．全血中除了葡萄糖還有哪些還原性物質(zhì) ? 實(shí)驗(yàn)六 血清中總膽固醇的測(cè)定 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 學(xué)習(xí)血清膽固醇的檢測(cè)方法 。如血沉淀放置后不變?yōu)樽丶t色或重濾后仍混濁，可在鎢酸與血混合液中加入 10％硫酸 1～ 2滴，待變?yōu)榘底厣? 再濾。如果由吸 管中放出血液的速度太快，會(huì)有大量血液粘在吸管內(nèi)壁，容量不準(zhǔn)，所以一般放出 1ml血液所用的時(shí)間不應(yīng)少于 1min。 A0247。 按下式計(jì)算 100ml全血中所含的血糖質(zhì)量（ mg）。第三只血糖管中加 2ml蒸餾水。每毫升無(wú)蛋白血濾液相當(dāng)于 。 10％（ m/V）鎢酸鈉溶液 動(dòng)物血（家兔心臟取血） 分光光度計(jì) 血糖管 奧氏吸管 水浴鍋 1表面皿 【 實(shí)驗(yàn)步驟 】 先在燒杯中加 （草酸鉀或草酸鈉），從家兔心臟取血 10ml放入燒杯，振蕩搖勻。置于 1000ml容量瓶中，緩慢加入 85%（ V/V）H3PO4225ml，邊加邊搖勻。該混合液在 4℃ 冰箱里可保存數(shù)日，如果暴露于陽(yáng)光下，數(shù)小時(shí)即失效。 堿性硫酸銅（現(xiàn)配現(xiàn)用）。 堿性硫酸銅溶液（ A、 B液） （ 1） A液：稱取無(wú)水碳酸鈉 ，酒石酸鈉 酸氫鈉 ，用蒸餾水溶解，然后用 1000ml容量瓶定容至刻度。 【 實(shí)驗(yàn)試劑與器材 】 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液 （ 1） 1%（ m/V）葡萄糖母液 稱取葡萄糖 ，溶于蒸餾水中，然后用 100ml容量瓶定容至刻度。 血液中的葡萄糖與堿性硫酸銅溶液共熱，銅離子即被血液中的葡萄糖還原成氧化亞銅，后者又可使鉬酸試劑還原成低價(jià)的鉬藍(lán)（藍(lán)色）。 【 實(shí)驗(yàn)原理 】 葡萄糖是血液主要的糖類，因此測(cè)血糖含量就是測(cè)血液中葡萄糖的含量。 鑒定：用二苯胺法測(cè)定 DNA 實(shí)驗(yàn)五 血液中葡萄糖的測(cè)定 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 （ 1）理解血糖在生物體內(nèi)的重要意義。操作步驟 重復(fù)處理一次。 （ 4）將 DNA粗品置于 檸檬酸三鈉溶液中，再加入 ，攪勻，加入一倍體積氯仿 異戊醇混合液，振搖 10min，離心 (4000r /min， 10min)，傾出上層液 (沉淀?xiàng)壢?)，加入 95%乙醇， DNA即沉淀析出。 （ 3）加入 5mol／Ｌ NaCl溶液 10ml，使 NaCl最終濃度達(dá)到 1mol/L，攪拌 10min，加入約一倍體積的氯仿 異戊醇混合液，振搖 20min，離心 10min(4000r/min )。加畢，置 60℃ 水浴保溫 10min(不停攪拌 )溶液變得粘稠并略透明，取出冷至室溫。所得沉淀為脫氧核糖核蛋白制品。 11 ． 實(shí)驗(yàn)材料與儀器 大白鼠肝臟、勻漿器、離心機(jī) 5000r/min、量筒 50ml( 1)、 25ml( 1)、 10ml( 1)、吸管 5ml( 2)、水浴鍋、真空干燥器。 9 ． 二苯胺試劑。 7 ． 3mol/L乙酸鈉 ／Ｌ EDTANa溶液：稱取 乙 酸鈉 408g、 ,稀釋至 1,000ml。 5 ． 氯仿 異戊醇混合液 :氯仿 :異戊醇 =24:1(V/V)。 3． 25％ SDS溶液：溶 25g十二烷基硫酸鈉于 100ml 45％乙醇。 【 實(shí)驗(yàn)試劑與器材 】 1． 5mol/LNaCl溶液：將 NaCl溶于水，稀釋至 1000ml。向溶液 中加入適量乙醇， DNA即析出。因此，可利用不同濃度的氯化鈉溶液，將脫氧核糖核蛋白和核糖核蛋白 從樣品中分別抽提出來(lái)。 【 實(shí)驗(yàn)原理 】 在濃氯化鈉 (12mol/L)溶液中，脫氧核糖蛋白的溶解度很大，核糖蛋白的溶解很小。 【 思考題 】 1. 電泳后，泳動(dòng)在最前面的為何種蛋白質(zhì)？分析原因。但操作時(shí)應(yīng)盡量減少緩沖液的污染、水分蒸發(fā)、 pH及離子強(qiáng)度的改變，并應(yīng)防止霉菌的滋長(zhǎng)。 9．要控制好電流，電壓和電泳時(shí)間。 7．選擇合適的緩沖液離子強(qiáng)度。 5．電泳槽蓋應(yīng)密封，蓋內(nèi)空間不宜過(guò)大。點(diǎn)樣量不宜過(guò)多，點(diǎn)樣位置要合適。 2．血清或其他電泳樣品應(yīng)新鮮。 【 實(shí)驗(yàn)步驟 】 1．薄膜準(zhǔn)備 2．點(diǎn)樣 3．電泳 4．染色和漂洗 5．薄膜和透明 6．定量 （ 1）洗脫法 注意！白蛋白因加入 NaOH的量比其他管多，其光密度值應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)，得到數(shù)值再代入上式中計(jì)算。 2 、染色液：取氨基黑 10B g，磺基水楊酸 10 g，加冰 醋酸 20ml，蒸餾水 400ml，搖勻溶解。這樣，血清蛋白質(zhì)在醋酸纖維素薄膜上就可以形成區(qū)帶，用以分離和分析蛋白質(zhì)。 實(shí)驗(yàn)三 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 掌握醋酸纖維素薄膜電泳的原理和操作過(guò)程 。 （ 2）要求在半天內(nèi)測(cè)定 60個(gè)樣品。 【 思考題 】 根據(jù)一下要求選擇一種或者幾種蛋白質(zhì)定量測(cè)定蛋白 質(zhì)濃度。 測(cè)定中，蛋白質(zhì) 染料復(fù)合物會(huì)吸附在比色皿上，實(shí)驗(yàn) 證明可以忽視。在標(biāo)準(zhǔn)曲