【正文】 管號 試劑 0 1 2 3 4 標準膽固醇應用液 /ml 0 醋酸 /ml 0 鄰苯二甲醛試劑 /ml 蒸餾水 /ml 混合酸 /ml 100ml樣品中總膽固醇含量 /mg 0 100 200 300 400 A550nm 樣品的測定 取 2支清潔干燥試管，編號后，按表加入試劑。 加畢，混勻，靜置 10min，于 550nm波長比色，以對照管校正零點，對照標準曲線即知 100ml樣品中總膽固醇含量（ mg）。其活性受到很多因素的影響，如溫度、 pH值以及抑制劑激活劑等。 【 實驗原理 】 在本實驗中，以稀釋的唾液作為淀粉酶液。它們遇碘呈不同的顏色。 淀粉在唾液淀粉酶的作用下水解： 淀粉 → 紫色糊精 → 紅色糊精 → 麥芽糖及少量葡萄糖 遇 I2分別呈現(xiàn)： 藍色 → 紫色 → 紅色 → 不顯色 由于在不同溫度，不同 pH，或者在有激活劑或抑制劑存在的條件下唾液淀粉酶的活性高低不同，則淀粉被水解的程度不同，所以，可由酶反應混合物遇碘所呈現(xiàn)的顏色來判斷，從而可了解上述諸因素對酶活性的影響。 (2) 稀釋：將酶提取液用水定容至 100mL。 （由于不同人或同一人不同時間收集到的唾液淀粉酶的活性并不相同，稀釋倍數(shù)可以是 50～ 300倍，甚至超過此范圍。將第 l、2號試管放入 37℃ 恒溫水浴中保溫，第 3號試管放入冰水 中冷卻， 5分鐘后，向第 l號試管中加人煮沸 5一 15分鐘的稀釋唾液 l毫升；向第 3號試管加稀釋唾液各 l毫升。判斷淀粉被唾液酶水解的程度，并說明溫度對唾液酶活性的影響。向第 l支試管中加入 l%氯化鈉溶液 l毫升，向第 2支試管中加入 %的硫酸銅溶液 l毫升，向第 3支試管中加入蒸餾水 l毫升作對照。搖勻各管內(nèi)容物，一齊放入 37℃ 恒溫水浴中保溫， 10~15分鐘后取出。觀察比較 3支試管顏色的深淺。這是因為淀粉與碘液生產(chǎn)的藍色物質(zhì)加熱會變成無色，如果不冷卻而直接加入碘液會使生成的藍色物質(zhì)變?yōu)闊o色，導致得出錯誤的實驗結(jié)果。 2. 進一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技能。 抗壞血酸能還 原染料 2， 6— 二氯酚靛酚鈉鹽，本身則氧化成脫氫抗壞 血酸。 因此，可用 2， 6— 二氯酚滴定樣品中還原型抗壞血酸。如無其他雜質(zhì)干擾，樣品提取液所還原的標準染料量與樣品中所合的還原型抗壞血酸量成正比。 2． 1％草酸溶液：溶 1g草酸于 100 ml蒸餾水。 4． 1％ HCl溶液。 6. 松針、新鮮蔬菜 (辣椒、青菜、西紅柿等 )、新鮮水果(桔子、柑子、橙、柚等 )。稱取 0． 5g，放入研缽中，加 1%HCl溶液 5m1一起研磨。如此反復 2— 3次。 (2)新鮮蔬菜和水果類：水洗凈，用紗布或吸水紙吸干表面水分。稱取漿狀物 5． 0g，倒入 50 m1容量瓶中以 2％草酸溶液稀釋至刻廢。濾液備用。由所用染科的體積計算出 1m1染料相當于多少 mg抗壞血酸。 3．計算 V＝滴定時所用去染料 ml數(shù)。 W＝ 10 ml樣液相當于含樣品之 g數(shù)。 實驗九 脂肪酸的 β 氧化 【 實驗目的 】 （ 1）了解脂肪酸的 β氧化。 【 實驗原理 】 根據(jù) β氧化學說，機體組織能將脂肪酸氧化生成乙酰輔酶 A。在肝臟內(nèi)，乙酰乙酸可脫羧生成丙酮，也可還原生成 β羥丁酸。酮體為機體代謝的中間產(chǎn)物。本實驗用新鮮肝糜與丁酸保溫，生成的丙酮可用碘仿反應測定。反應式如下： 2NaOH+I2→NaIO+NaI+H 2O CH3COCH3+3NaOI→CHI 3+CH3COONa+2NaOH 剩余的碘，可用標準硫代硫酸鈉滴定。 【 實驗試劑與器材 】 %（ m/V）淀粉溶液 %（ m/V） NaCl溶液 15%三氯乙酸溶液 10%氫氧化鈉溶液 10%鹽酸溶液 標準 1/15 mol/L 恒溫水浴 1微量滴定裝置 1解剖用具 1玻璃器皿 【 實驗步驟 】 肝糜制備 （ 1）將家兔頸部放血處死，取出肝臟；用 %NaCl溶液洗去污血；用濾紙吸去表面的水分。再加 %NaCl溶液至總體積 10ml，得肝組織糜。 試 劑 錐 形 瓶 編 號 1號（樣品） 2號（對照） V(1/15 mol/L 液 )/ml 3 3 V()/ml 2 V(肝組織糜 )/ml 2 2 混勻，置于 43℃ 恒溫水浴內(nèi)保溫 V(15%三氯乙酸溶液 )/ml 3 3 V()/ml 2 混勻，靜置 15min，過濾，濾液分別收集于 2支試管中 混勻后立即用 余的碘，滴至淺黃色時，記錄滴定 A瓶與 B瓶溶液所用硫代硫酸鈉溶液的毫升數(shù)，并按下式計算樣品中的丙酮含量。 6 式中： V對照為滴定對照所消耗的標準 Na2S2O3溶液的體積，以 ml為單位； V樣品為滴定對樣品消耗的標準 Na2S2O3溶液的體積，以 ml為單位； CNa2S2O3為標準 Na2S2O3溶液的濃度（ mol/L）。 注意滴定終點的控制，保證實驗的準確度 。 【 實驗原理 】 能催化同一反應而蛋白質(zhì)結(jié)構不同的酶，稱為同工酶。 本實驗是用瓊脂糖凝膠電泳法分離人血清乳酸脫 氫酶 5個同工酶（ LDH LDH2 、 LDH LDH4 和LDH5 ）。Na2溶液 %瓊脂糖凝膠 %~%瓊脂糖染色膠 顯色液 2%醋酸緩沖液 電泳用緩沖液（ ， ） 人血清 水平臺，水平儀 1烘箱 1電泳槽 1電泳儀 1微量注射器 【 實驗步驟 】 瓊脂糖凝膠板的制備和電泳 將 %瓊脂糖凝膠水浴加熱溶化，取 2ml溶化的凝膠液平澆于一潔凈的載玻片上。 用微量注射器向小槽內(nèi)加入新鮮血清 10~15μl，將 凝膠板放在電泳槽內(nèi)，兩端各以浸有電泳用緩沖液的紗布作鹽橋，點樣端靠近陰極。 顯色 約于電泳終止前 10min，將 %~%瓊脂糖染色膠在水浴中溶化。最靠近陽極端區(qū)帶是 LDH1，依次為 LDH2 、 LDH3和 LDH4， LDH5則移向陰極端。 如需定量，可用光密度計測定各區(qū)帶。 掌握等電點沉淀法提取蛋白質(zhì)的方法。 酪蛋白是一些含磷蛋白質(zhì)的混合物 ， 等電點為。 用乙醇洗滌沉淀物 ，除去脂類雜質(zhì)后便可得到純酪蛋白 。在攪拌下慢慢加入預熱至 40℃ 、 100mL，用精密 pH試紙或酸度 計調(diào) pH至 。離心 15分鐘（ 3000 r /min）。 （二）酪蛋白的純化 3次，離心 10分鐘（ 3 000r/min），棄去上清液。用乙醇 — 乙醚混合液洗沉淀 2次。 ，風干；得酪蛋白純品。 含量：酪蛋白 g/100 mL牛乳 式中理論含量為 。 100%?測得含量得率:理論含量實驗十二 肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力測定 【 實驗目的 】 掌握谷丙轉(zhuǎn)氨酶的測定方法。丙酮酸與 ，生成二硝基苯腙，此物在堿性溶液呈紅棕色，與經(jīng)同樣處理的標準丙酮酸比色，求得丙酮酸的生成量以表示酶的活性。 2. 谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力的測定 1）取 4支試管，標注名稱，按照下表操作 2）計算酶活力 本法規(guī)定：酶在 37℃ 與底物作用 30分鐘，產(chǎn)生 丙酮酸為一個谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性單位。 2,4二硝基苯肼身也有類似的顏色，因此空白管顏