【正文】 100 式中： m： 100ml血中所含的糖質量 C0：標準葡萄糖溶液濃度 A1：樣品溶液吸光度 A0：標準溶液吸光度 【 注意事項 】 ，所取血液的量必須準確。 【 實驗試劑與器材 】 鄰苯二甲醛試劑 90%醋酸 混合酸 標準膽固醇貯液（ 1mg/ml） 標準膽固醇應用液（ ） 人血清 試管 吸管 容量瓶 燒杯 1電子分析天平 1 722型（或 7220型）分光光度計 【 實驗步驟 】 標準曲線的繪制 取清潔干燥試管 5支，編號，按表加入試劑。 【 實驗原理 】 在本實驗中，以稀釋的唾液作為淀粉酶液。 （由于不同人或同一人不同時間收集到的唾液淀粉酶的活性并不相同，稀釋倍數(shù)可以是 50～ 300倍，甚至超過此范圍。搖勻各管內容物，一齊放入 37℃ 恒溫水浴中保溫， 10~15分鐘后取出。 抗壞血酸能還 原染料 2， 6— 二氯酚靛酚鈉鹽，本身則氧化成脫氫抗壞 血酸。 4． 1％ HCl溶液。 (2)新鮮蔬菜和水果類：水洗凈，用紗布或吸水紙吸干表面水分。 3．計算 V＝滴定時所用去染料 ml數(shù)。在肝臟內，乙酰乙酸可脫羧生成丙酮，也可還原生成 β羥丁酸。 【 實驗試劑與器材 】 %（ m/V）淀粉溶液 %（ m/V） NaCl溶液 15%三氯乙酸溶液 10%氫氧化鈉溶液 10%鹽酸溶液 標準 1/15 mol/L 恒溫水浴 1微量滴定裝置 1解剖用具 1玻璃器皿 【 實驗步驟 】 肝糜制備 （ 1）將家兔頸部放血處死，取出肝臟；用 %NaCl溶液洗去污血；用濾紙吸去表面的水分。 注意滴定終點的控制，保證實驗的準確度 。 用微量注射器向小槽內加入新鮮血清 10~15μl，將 凝膠板放在電泳槽內，兩端各以浸有電泳用緩沖液的紗布作鹽橋，點樣端靠近陰極。 掌握等電點沉淀法提取蛋白質的方法。離心 15分鐘（ 3000 r /min）。 含量：酪蛋白 g/100 mL牛乳 式中理論含量為 。 2,4二硝基苯肼身也有類似的顏色，因此空白管顏 色較深。丙酮酸與 ，生成二硝基苯腙，此物在堿性溶液呈紅棕色，與經同樣處理的標準丙酮酸比色，求得丙酮酸的生成量以表示酶的活性。用乙醇 — 乙醚混合液洗沉淀 2次。 用乙醇洗滌沉淀物 ，除去脂類雜質后便可得到純酪蛋白 。最靠近陽極端區(qū)帶是 LDH1，依次為 LDH2 、 LDH3和 LDH4， LDH5則移向陰極端。 本實驗是用瓊脂糖凝膠電泳法分離人血清乳酸脫 氫酶 5個同工酶（ LDH LDH2 、 LDH LDH4 和LDH5 ）。 試 劑 錐 形 瓶 編 號 1號（樣品） 2號（對照） V(1/15 mol/L 液 )/ml 3 3 V()/ml 2 V(肝組織糜 )/ml 2 2 混勻，置于 43℃ 恒溫水浴內保溫 V(15%三氯乙酸溶液 )/ml 3 3 V()/ml 2 混勻，靜置 15min，過濾，濾液分別收集于 2支試管中 混勻后立即用 余的碘，滴至淺黃色時，記錄滴定 A瓶與 B瓶溶液所用硫代硫酸鈉溶液的毫升數(shù)，并按下式計算樣品中的丙酮含量。本實驗用新鮮肝糜與丁酸保溫，生成的丙酮可用碘仿反應測定。 實驗九 脂肪酸的 β 氧化 【 實驗目的 】 （ 1）了解脂肪酸的 β氧化。濾液備用。稱取 0． 5g，放入研缽中，加 1%HCl溶液 5m1一起研磨。如無其他雜質干擾，樣品提取液所還原的標準染料量與樣品中所合的還原型抗壞血酸量成正比。這是因為淀粉與碘液生產的藍色物質加熱會變成無色，如果不冷卻而直接加入碘液會使生成的藍色物質變?yōu)闊o色，導致得出錯誤的實驗結果。判斷淀粉被唾液酶水解的程度，并說明溫度對唾液酶活性的影響。 淀粉在唾液淀粉酶的作用下水解： 淀粉 → 紫色糊精 → 紅色糊精 → 麥芽糖及少量葡萄糖 遇 I2分別呈現(xiàn)： 藍色 → 紫色 → 紅色 → 不顯色 由于在不同溫度，不同 pH，或者在有激活劑或抑制劑存在的條件下唾液淀粉酶的活性高低不同，則淀粉被水解的程度不同，所以，可由酶反應混合物遇碘所呈現(xiàn)的顏色來判斷，從而可了解上述諸因素對酶活性的影響。 加畢，混勻，靜置 10min，于 550nm波長比色，以對照管校正零點，對照標準曲線即知 100ml樣品中總膽固醇含量（ mg）。 ，尚有其他還原性物質，所以實驗結果可能偏高 20%～ 30%。然后各加 2ml新配置的堿性硫酸銅溶液，同時置沸水浴內煮 6min，取出，在流水中迅速冷卻，各加入 4ml酸性鉬酸鹽溶液， 1min后以蒸餾水稀釋至25ml，混勻，倒入比色杯，用 722型風光光度計于420～ 440nm波長比色（先以空白管調節(jié)零點，然后測標準管和樣品管）。 酸性鉬酸鹽溶液 稱取鉬酸鈉 ，置燒杯中用蒸餾水溶解，倒入500ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，然后移入另一較大的試劑瓶中，加溴水 ，搖勻，靜置數(shù)小時。血糖的含量與產生的氧化亞銅成正比，氧化亞銅的量與形成的鉬化合物的量成正比，可以用比色的方法進行測定。離心，棄去上清液，沉淀 (粗 DNA）。 【 實驗步驟 】 1． DNA的分離純化： （ 1）將新鮮豬肝用 mol/／Ｌ EDTA溶液洗去血液，剪碎，加入 50 mol/LNaCl／Ｌ EDTA溶液 ,置勻漿器中研磨 .待研磨成糊狀后，將糊狀物離心 10min(4000r/min)，棄去上清液，沉 淀用 mol/／Ｌ EDTA溶液洗二、三次。 ４． ／Ｌ檸檬酸三鈉溶液 ,氯化 鈉 ,稀釋至 1,000ml。在稀氯化鈉 ()溶液中，脫氧核糖核蛋白的溶解度很小，核糖核蛋白的溶解度很大。 8．兩電泳槽內緩沖液面應在同一水平。 + 白蛋白 (A) α2 β γ α1 %1 0 0% ?? 各管光密度讀數(shù)之和該種蛋白管光密度讀數(shù)）百分數(shù)（每種蛋白占總蛋白量的（ 2）光密度計法 （ 3）用本法定量，正常人數(shù)值為： 白蛋白 % ~ % 540 ~ 730 g/L α1球蛋白 % ~ % 28 ~ 51 g/L α2球蛋白 % ~ % 63 ~ 106 g/L β球蛋白 % ~ % 52 ~ 110 g/L γ球蛋白 % ~ % 125 ~ 200 g/L 【 注意事項 】 1．醋酸纖維素薄膜的質量對結果影響很大，最好選用同一批號、薄膜厚度均勻、質量良好的醋酸纖維素薄膜。 （ 3）要求很迅速的測定一系列試管（ 30只）中溶液的蛋 白質濃度 試著比較該法與其他幾種方法的優(yōu)缺點。 試管號 試劑 1 2 3 4 5 6 1mg/ml標準蛋白液 /ml NaCl/ml 1 考馬斯亮藍染液 /ml 搖勻， 1小時內以 1號管為空白對照，在 595nm處比色 A595nm 二、未知樣液的測定 另取一干凈試管，加入樣品 ，混勻，室溫靜置 3min，于波長 595nm處比色，讀取吸光度。 蛋白質與染料結合速度很快， 2min就可以反應完全，并可以穩(wěn)定 1h，蛋白質 染料復合物有很大的消光系數(shù)，使得測定蛋