【正文】 100%?測得含量得率:理論含量實驗十二 肝臟谷丙轉氨酶活力測定 【 實驗目的 】 掌握谷丙轉氨酶的測定方法。 酪蛋白是一些含磷蛋白質的混合物 ， 等電點為。 【 實驗原理 】 能催化同一反應而蛋白質結構不同的酶，稱為同工酶。酮體為機體代謝的中間產(chǎn)物。稱取漿狀物 5． 0g，倒入 50 m1容量瓶中以 2％草酸溶液稀釋至刻廢。 因此，可用 2， 6— 二氯酚滴定樣品中還原型抗壞血酸。將第 l、2號試管放入 37℃ 恒溫水浴中保溫，第 3號試管放入冰水 中冷卻， 5分鐘后，向第 l號試管中加人煮沸 5一 15分鐘的稀釋唾液 l毫升；向第 3號試管加稀釋唾液各 l毫升。 管號 試劑 0 1 2 3 4 標準膽固醇應用液 /ml 0 醋酸 /ml 0 鄰苯二甲醛試劑 /ml 蒸餾水 /ml 混合酸 /ml 100ml樣品中總膽固醇含量 /mg 0 100 200 300 400 A550nm 樣品的測定 取 2支清潔干燥試管，編號后，按表加入試劑。 取具 25ml刻度的血糖管 3只，編號，用奧氏吸管吸取無蛋白血濾液 2ml，放入第一只血糖管中，于第二只 血糖管中加 2ml標準葡萄糖溶液。測定血液中葡萄糖的含量，即測復雜組分中一種物質的量，根據(jù)生化實驗基本技術的原理，可采用分光光度法（比色法）進行測定。 10 ． 1mol／Ｌ過氯酸溶液，將 10ml過氯酸 (70%)用蒸餾 水稀釋至 11ml。 2. 點樣時，置于電場的正極還是負極，為什么？ 實驗四 動物肝肝臟 DNA的分離與鑒定 【 實驗目的 】 學習常用的 DNA分離方法 。 漂洗液： ％醋酸 洗脫液： mol/L NaOH溶液 透明液：無水乙醇 7份，冰醋酸 3份混合即成。 漩渦混合器 移液管 （ 2）， （ 2）， 5ml（ 1） 分光光度計 試管 15cm ( 8) 量筒 100ml( 1) 電子分析天平 1試管架 ( 1) 【 實驗步驟 】 一、標準曲線線的繪制 取 7支干凈試管，按下表進行編號并加入試劑。 圖 1．原點； 2．層析點； 3．溶劑前沿 5 ．計算 用尺量出原點到斑點中心距離以及原點到溶劑前沿距離，計算各標準氨基酸和混合氨基酸的 Rf值。 混合氨基酸溶液 6mg/ml。通過實驗有助于學生加深對生物化學的基本知識和基本理論的理解，掌握生物化學的主要方法與技術，包括經(jīng)典的、常規(guī)的、以及現(xiàn)代的方法與技術。 Rf值的定義為： Rf =(原點到層析斑點中心的距離 )/（原點到溶劑前沿的距離） 用紙層析鑒定樣品時，一般都與標準品相比較。 當溶劑前沿到達離上端 2 cm處，取出濾紙，用鉛筆描出溶劑前沿，晾干。 【 實驗試劑與器材 】 標準蛋白液（ ） %NaCl 稀釋到 2022ml。這樣，血清蛋白質在醋酸纖維素薄膜上就可以形成區(qū)帶，用以分離和分析蛋白質。但操作時應盡量減少緩沖液的污染、水分蒸發(fā)、 pH及離子強度的改變，并應防止霉菌的滋長。 7 ． 3mol/L乙酸鈉 ／Ｌ EDTANa溶液：稱取 乙 酸鈉 408g、 ,稀釋至 1,000ml。 鑒定：用二苯胺法測定 DNA 實驗五 血液中葡萄糖的測定 【 實驗目的 】 （ 1）理解血糖在生物體內(nèi)的重要意義。 10％（ m/V）鎢酸鈉溶液 動物血（家兔心臟取血） 分光光度計 血糖管 奧氏吸管 水浴鍋 1表面皿 【 實驗步驟 】 先在燒杯中加 （草酸鉀或草酸鈉），從家兔心臟取血 10ml放入燒杯，振蕩搖勻。 100ml樣品中膽固醇含量在400mg之內(nèi)與吸光度呈良好線性關系。作為唾液淀粉酶的樣品液。 【 實驗原理 】 維生素 C是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，缺乏 時會產(chǎn)生壞血病，因此又稱為抗壞血酸。最后用 1％ ECt溶液稀釋到刻度并混勻，靜置 10分鐘，過濾，濾液備用。兩分子乙酰輔酶 A可再縮合成乙酰乙酸。 【 注意事項 】 用新鮮肝糜進行實驗，確保肝內(nèi)酶活力。 實驗十一 酪蛋白的制備 【 實驗目的 】 學習從牛奶中制備酪蛋白的原理和方法。 （三）準確稱重，計算含量和得率。 丙酮酸二硝基苯腙紅棕色2 , 4 二硝基苯肼C O O HCH2CH2C OC O O HC O O HCH2CH2C H N H2C O O HCH3C H N H2C O O HG P TCH3C OC O O HCH3C N NHNO2NO2H2OOHH2N HNNO2NO2C O O H【 實驗試劑與器材 】 標準丙酮酸 （現(xiàn)配） 谷丙轉氨酶底物 4℃ ， 1周 PB % 2,4二硝基苯肼溶液 NaOH 新鮮肝臟（購買或取活的小白鼠肝臟） 剪刀 或 組織搗碎機 37℃ 水浴 分光光度計（ 520nm） 比色皿 1計算紙（ 9 cm 9 cm） 【 實驗步驟 】 處理： 20g 肝先用生理鹽水洗凈，濾紙吸干水，再用預冷的 PB搗碎，并定容至 200ml，供全班用。 【 實驗試劑與器材 】 新鮮牛奶 95%乙醇 無水乙醚 —— 醋酸鈉緩沖液 乙醇 —— 乙醚混合液：乙醇 ∶ 乙醚 =1 ∶ 1（ V/V） 離心機 抽濾裝置 精密 pH試紙或酸度計 電爐 溫度計 【 實驗步驟 】 （一）酪蛋白的粗提 100mL牛奶加熱至 40℃ 。 【 實驗試劑與器材 】 巴比妥 — HCl緩沖液（ ， ） 在堿性的條件下，丙酮與碘生成碘仿。 2．滴定 (1)標準液滴定：準確吸取標準抗壞血酸溶液 1． 0ml(含0． 1mg抗壞血酸 )置 100 ml錐形瓶中，加 9ml1%草酸，微量摘定管以 0． 1％ 2， 6— 二氯酚靛酚滴定至淡紅色，并保持 15秒鐘即為終點。 【 實驗試劑與器材 】 1． 2％草酸溶液：草酸 2g，溶于 100m1蒸餾水。 3. 抑制劑和激活劑對酶活性的影響 取 3支試管，編號。 管號 試劑 對照 樣品 醋酸 /ml 血清 /ml 鄰苯二甲醛試劑 /ml 0 無水乙醇 /ml 0 混合酸 /ml 實驗七 唾液淀粉酶活性的觀察 【 實驗目的 】 酶是化學本質為蛋白質的生物催化劑。 按下式計算 100ml全血中所含的血糖質量（ mg）。 【 實驗試劑與器材