【正文】 】 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液 （ 1） 1%（ m/V）葡萄糖母液 稱取葡萄糖 ，溶于蒸餾水中，然后用 100ml容量瓶定容至刻度。所得沉淀為脫氧核糖核蛋白制品。因此，可利用不同濃度的氯化鈉溶液，將脫氧核糖核蛋白和核糖核蛋白 從樣品中分別抽提出來。 2．血清或其他電泳樣品應(yīng)新鮮。在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找蛋白質(zhì)濃度。 (3)展層結(jié)束后，切 勿忘記 用鉛筆描出溶劑前沿。 剪刀。 。由于物質(zhì)的極性大小不同，在兩相中分配比例有所差異。每個(gè)樣品共點(diǎn) 2次。 蛋白質(zhì)與染料結(jié)合速度很快， 2min就可以反應(yīng)完全，并可以穩(wěn)定 1h，蛋白質(zhì) 染料復(fù)合物有很大的消光系數(shù)，使得測定蛋白質(zhì)濃度是靈敏度很高。 （ 3）要求很迅速的測定一系列試管（ 30只）中溶液的蛋 白質(zhì)濃度 試著比較該法與其他幾種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。 8．兩電泳槽內(nèi)緩沖液面應(yīng)在同一水平。 ４． ／Ｌ檸檬酸三鈉溶液 ,氯化 鈉 ,稀釋至 1,000ml。離心，棄去上清液，沉淀 (粗 DNA）。 酸性鉬酸鹽溶液 稱取鉬酸鈉 ，置燒杯中用蒸餾水溶解，倒入500ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，然后移入另一較大的試劑瓶中，加溴水 ，搖勻，靜置數(shù)小時(shí)。 ，尚有其他還原性物質(zhì)，所以實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能偏高 20%～ 30%。 淀粉在唾液淀粉酶的作用下水解： 淀粉 → 紫色糊精 → 紅色糊精 → 麥芽糖及少量葡萄糖 遇 I2分別呈現(xiàn)： 藍(lán)色 → 紫色 → 紅色 → 不顯色 由于在不同溫度，不同 pH，或者在有激活劑或抑制劑存在的條件下唾液淀粉酶的活性高低不同，則淀粉被水解的程度不同，所以，可由酶反應(yīng)混合物遇碘所呈現(xiàn)的顏色來判斷，從而可了解上述諸因素對(duì)酶活性的影響。這是因?yàn)榈矸叟c碘液生產(chǎn)的藍(lán)色物質(zhì)加熱會(huì)變成無色，如果不冷卻而直接加入碘液會(huì)使生成的藍(lán)色物質(zhì)變?yōu)闊o色，導(dǎo)致得出錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。稱取 0． 5g，放入研缽中，加 1%HCl溶液 5m1一起研磨。 實(shí)驗(yàn)九 脂肪酸的 β 氧化 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 （ 1）了解脂肪酸的 β氧化。 試 劑 錐 形 瓶 編 號(hào) 1號(hào)（樣品） 2號(hào)（對(duì)照） V(1/15 mol/L 液 )/ml 3 3 V()/ml 2 V(肝組織糜 )/ml 2 2 混勻，置于 43℃ 恒溫水浴內(nèi)保溫 V(15%三氯乙酸溶液 )/ml 3 3 V()/ml 2 混勻，靜置 15min，過濾，濾液分別收集于 2支試管中 混勻后立即用 余的碘，滴至淺黃色時(shí)，記錄滴定 A瓶與 B瓶溶液所用硫代硫酸鈉溶液的毫升數(shù)，并按下式計(jì)算樣品中的丙酮含量。最靠近陽極端區(qū)帶是 LDH1，依次為 LDH2 、 LDH3和 LDH4， LDH5則移向陰極端。用乙醇 — 乙醚混合液洗沉淀 2次。 2,4二硝基苯肼身也有類似的顏色，因此空白管顏 色較深。離心 15分鐘（ 3000 r /min）。 用微量注射器向小槽內(nèi)加入新鮮血清 10~15μl，將 凝膠板放在電泳槽內(nèi)，兩端各以浸有電泳用緩沖液的紗布作鹽橋，點(diǎn)樣端靠近陰極。 【 實(shí)驗(yàn)試劑與器材 】 %（ m/V）淀粉溶液 %（ m/V） NaCl溶液 15%三氯乙酸溶液 10%氫氧化鈉溶液 10%鹽酸溶液 標(biāo)準(zhǔn) 1/15 mol/L 恒溫水浴 1微量滴定裝置 1解剖用具 1玻璃器皿 【 實(shí)驗(yàn)步驟 】 肝糜制備 （ 1）將家兔頸部放血處死，取出肝臟；用 %NaCl溶液洗去污血；用濾紙吸去表面的水分。 3．計(jì)算 V＝滴定時(shí)所用去染料 ml數(shù)。 4． 1％ HCl溶液。搖勻各管內(nèi)容物，一齊放入 37℃ 恒溫水浴中保溫， 10~15分鐘后取出。 【 實(shí)驗(yàn)原理 】 在本實(shí)驗(yàn)中，以稀釋的唾液作為淀粉酶液。 100 式中： m： 100ml血中所含的糖質(zhì)量 C0：標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液濃度 A1：樣品溶液吸光度 A0：標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度 【 注意事項(xiàng) 】 ，所取血液的量必須準(zhǔn)確。 （ 2） B液：稱取硫酸銅 ，用蒸餾水溶解，然后用100ml容量瓶定容至刻度，加幾滴濃硫酸作為保存劑。此步操作 系使核酸與蛋白質(zhì)分離。 為了防止 DNA(或 RNA)酶解，提取時(shí)加入 EDTA(乙二胺四乙酸）。 4．鹽橋要放置平整，保證電場均勻。測定完后可以用乙醇洗干凈。 實(shí)驗(yàn)二 考馬斯亮藍(lán)結(jié)合法測定蛋白質(zhì)濃度 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 學(xué)習(xí)考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)濃度的原理和方法。 電吹風(fēng)（ 1）。所用設(shè)備簡單、操作方便，使用樣品少，分離效果好，為近 代生物化學(xué)分析中重要技術(shù)之一。此法廣泛地應(yīng)用于科研和生產(chǎn)分析工作中。 1 722型（或 7220型）分光光度計(jì)。 【 實(shí)驗(yàn)原理 】 考馬斯亮藍(lán)測定蛋白質(zhì)含量是利用蛋白質(zhì) 染料結(jié)合法的原理，定量測定微量蛋白質(zhì)濃度快速、靈敏的方法。 【 思考題 】 根據(jù)一下要求選擇一種或者幾種蛋白質(zhì)定量測定蛋白 質(zhì)濃度。 5．電泳槽蓋應(yīng)密封，蓋內(nèi)空間不宜過大。 【 實(shí)驗(yàn)試劑與器材 】 1． 5mol/LNaCl溶液：將 NaCl溶于水，稀釋至 1000ml。 （ 3）加入 5mol／Ｌ NaCl溶液 10ml，使 NaCl最終濃度達(dá)到 1mol/L，攪拌 10min，加入約一倍體積的氯仿 異戊醇混合液，振搖 20min，離心 10min(4000r/min )。 堿性硫酸銅（現(xiàn)配現(xiàn)用）。如果由吸 管中放出血液的速度太快，會(huì)有大量血液粘在吸管內(nèi)壁，容量不準(zhǔn)，所以一般放出 1ml血液所用的時(shí)間不應(yīng)少于 1min。唾液內(nèi)的淀粉酶可將淀粉逐步水解成各種不同大小的糊精分子，最終產(chǎn)物為麥芽糖和少量的葡萄糖。冷后，各滴入 2一 3滴碘溶液，混勻。 5． ％ 2,6— 二氯酚靛酚溶液。 T=1ml染料能氧化抗壞血酸 mg數(shù)。 （ 2）稱取肝組織 5g置研缽中，加少量 %NaCl溶液，研磨成細(xì)漿。電泳 40~60min，電壓約100伏。棄去清液，得酪蛋白粗制品。 。 30mL乙醇，攪拌片刻，將全部懸濁液轉(zhuǎn) 移至布氏漏斗中抽濾。取此溶化的凝膠 ，立即澆在電泳完畢的凝膠板上， 37℃ 避光保溫 1h，即顯示出五條深淺不等的藍(lán)紫色區(qū)帶。 酮體生成和沉淀蛋白質(zhì) 取 50ml錐形瓶 2只，編號(hào)，并按下表操作。 【 思考題 】 試述本實(shí)驗(yàn)介紹的 2， 6二氯酚靛酚滴定法的優(yōu)缺點(diǎn)。 【 實(shí)驗(yàn)步驟 】 1．不同樣品用不同方法提取 (1)松針：水洗凈，用濾紙吸去表面水分。 【 注意事項(xiàng) 】 沸水浴中的試管在加入碘液之前一定要在自來水下冷卻。直鏈淀粉（即可溶性淀粉）遇碘呈藍(lán)色；糊精按分子從大到小的順序，遇碘可呈藍(lán)色、紫色、暗褐色和紅色，最小的糊精和麥芽糖遇碘不顯顏色。如血沉淀放置后不變?yōu)樽丶t色或重濾后仍混濁，可在鎢酸與血混合液中加入 10％硫酸 1～ 2滴，待變?yōu)榘底厣? 再濾。該混合液在 4℃ 冰箱里可保存數(shù)日，如果暴露于陽光下，數(shù)小時(shí)即失效。 （ 4）將 DNA粗品置于 檸檬酸三鈉溶液中，再加入 ，攪勻，加入一倍體積氯仿 異戊醇混合液，振搖 10min，離心 (4000r /min， 10min)，傾出上