【正文】 ，用濾紙吸去表面水分。 3．標準抗壞血酸溶液。當抗壞血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使墑定液呈談紅色，即為終點。 【 實驗原理 】 維生素 C是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，缺乏 時會產(chǎn)生壞血病，因此又稱為抗壞血酸。 【 注意事項 】 沸水浴中的試管在加入碘液之前一定要在自來水下冷卻。再向每支試管各加入 %淀粉溶液 3毫升和稀釋的唾液 l毫升。搖勻， 20分鐘后取出 3支試管，各加碘溶液 2滴，混勻，比較各管溶液的顏色。作為唾液淀粉酶的樣品液。直鏈淀粉（即可溶性淀粉）遇碘呈藍色；糊精按分子從大到小的順序，遇碘可呈藍色、紫色、暗褐色和紅色，最小的糊精和麥芽糖遇碘不顯顏色。通過本次的實驗觀察，同學們應(yīng)該更加深刻的理解理論課上所講的酶促反應(yīng)動力學的內(nèi)容。 顯色時要避免高溫，采用混合酸液反應(yīng)時溫度不會升得太高，一般在 4~32℃ 時，顏色能穩(wěn)定 2h。 100ml樣品中膽固醇含量在400mg之內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。如血沉淀放置后不變?yōu)樽丶t色或重濾后仍混濁，可在鎢酸與血混合液中加入 10％硫酸 1～ 2滴，待變?yōu)榘底厣? 再濾。 A0247。第三只血糖管中加 2ml蒸餾水。 10％（ m/V）鎢酸鈉溶液 動物血（家兔心臟取血） 分光光度計 血糖管 奧氏吸管 水浴鍋 1表面皿 【 實驗步驟 】 先在燒杯中加 （草酸鉀或草酸鈉），從家兔心臟取血 10ml放入燒杯，振蕩搖勻。該混合液在 4℃ 冰箱里可保存數(shù)日，如果暴露于陽光下，數(shù)小時即失效。 堿性硫酸銅溶液（ A、 B液） （ 1） A液：稱取無水碳酸鈉 ，酒石酸鈉 酸氫鈉 ，用蒸餾水溶解，然后用 1000ml容量瓶定容至刻度。 血液中的葡萄糖與堿性硫酸銅溶液共熱，銅離子即被血液中的葡萄糖還原成氧化亞銅，后者又可使鉬酸試劑還原成低價的鉬藍（藍色）。 鑒定：用二苯胺法測定 DNA 實驗五 血液中葡萄糖的測定 【 實驗?zāi)康?】 （ 1）理解血糖在生物體內(nèi)的重要意義。 （ 4）將 DNA粗品置于 檸檬酸三鈉溶液中，再加入 ，攪勻，加入一倍體積氯仿 異戊醇混合液，振搖 10min，離心 (4000r /min， 10min)，傾出上層液 (沉淀棄去 )，加入 95%乙醇， DNA即沉淀析出。加畢，置 60℃ 水浴保溫 10min(不停攪拌 )溶液變得粘稠并略透明，取出冷至室溫。 11 ． 實驗材料與儀器 大白鼠肝臟、勻漿器、離心機 5000r/min、量筒 50ml( 1)、 25ml( 1)、 10ml( 1)、吸管 5ml( 2)、水浴鍋、真空干燥器。 7 ． 3mol/L乙酸鈉 ／Ｌ EDTANa溶液：稱取 乙 酸鈉 408g、 ,稀釋至 1,000ml。 3． 25％ SDS溶液：溶 25g十二烷基硫酸鈉于 100ml 45％乙醇。向溶液 中加入適量乙醇， DNA即析出。 【 實驗原理 】 在濃氯化鈉 (12mol/L)溶液中，脫氧核糖蛋白的溶解度很大，核糖蛋白的溶解很小。但操作時應(yīng)盡量減少緩沖液的污染、水分蒸發(fā)、 pH及離子強度的改變，并應(yīng)防止霉菌的滋長。 7．選擇合適的緩沖液離子強度。點樣量不宜過多，點樣位置要合適。 【 實驗步驟 】 1．薄膜準備 2．點樣 3．電泳 4．染色和漂洗 5．薄膜和透明 6．定量 （ 1）洗脫法 注意！白蛋白因加入 NaOH的量比其他管多，其光密度值應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)，得到數(shù)值再代入上式中計算。這樣，血清蛋白質(zhì)在醋酸纖維素薄膜上就可以形成區(qū)帶，用以分離和分析蛋白質(zhì)。 （ 2）要求在半天內(nèi)測定 60個樣品。 測定中，蛋白質(zhì) 染料復合物會吸附在比色皿上，實驗 證明可以忽視。以A595為縱坐標，標準蛋白質(zhì)年濃度為橫坐標，繪制標準曲線。 【 實驗試劑與器材 】 標準蛋白液（ ） %NaCl 稀釋到 2022ml。染料與蛋白質(zhì)結(jié)合后有紅色 棕黑色和藍色形式，最大光吸收由 465nm變成 595nm，測定 595 nm吸光的增加量，可以測定與其結(jié)合的蛋白質(zhì)的量。 (5)根據(jù)目的、要求，選擇合適溶劑系統(tǒng)。 【 注意事項 】 (1)在整個操作過程中，手只能接觸濾紙 邊緣 ，否則手指上的氨基酸會造成濾紙上眾多斑點。 當溶劑前沿到達離上端 2 cm處，取出濾紙，用鉛筆描出溶劑前沿，晾干。 2．點樣 在每個圈下用鉛筆記上每種氨基酸的代號（混合樣可寫 M），然后用毛細管吸取樣品，輕輕地點到相應(yīng)的氨基酸圈內(nèi)，待晾干或用冷風吹干后再點 1次。 微量注射器 10μl （ 1）或毛細管。 濾紙。 Rf值的定義為： Rf =(原點到層析斑點中心的距離 )/（原點到溶劑前沿的距離） 用紙層析鑒定樣品時，一般都與標準品相比較。由于濾紙纖維素上的羥基和水分子有較大的親和力，而與有機溶劑的親和力相對較弱，因此我們認為水相為固定相，有機溶劑相為移動相。紙上層析法是分離、鑒定和定量測定氨基酸、糖類、抗生素等有機物質(zhì)的一項重要而簡便的分析方法。 目 錄 ? 實驗一 氨基酸的分離鑒定 —— 紙層析法 (操作性 ) 4學時 ? 實驗二 考馬斯亮藍結(jié)合法測定蛋白質(zhì)濃度 (操作性 ) 3學時 ? 實驗三 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳 (驗證性 ) 5學時 ? 實驗四 動物肝肝臟 DNA的分離與鑒定 (操作性 ) 3學時 ? 實驗五 血液中葡萄糖的測定 (操作性 ) 3學時 ? 實驗六 血清中總膽固醇的測定 (操作性 ) 4學時 ? 實驗七 唾液淀粉酶活性的觀察 (綜合性 ) 4學時 ? 實驗八 維生素 C的定量測定 (操作性 ) 4學時 ? 實驗九 脂肪酸的 β氧化 (操作性 ) 4學時 ? 實驗十 瓊脂糖膠電泳法分離乳酸脫氫同工酶 (操作性 ) 4學時 ? 實驗十一 酪蛋白的制備 (操作性 ) 4學時 ? 實驗十二 肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力測定 (綜合性 ) 3學時 實驗一 氨基酸的分離鑒定 —— 紙層析法 【 實驗?zāi)康?】 。通過實驗有助于學生加深對生物化學的基本知識和基本理論的理解，掌握生物化學的主要方法與技術(shù)，包括經(jīng)典的、常規(guī)的、以及現(xiàn)代的方法與技術(shù)。 【 實驗原理 】 紙上層析法是分配層析法中的一種，常以濾紙為惰性支持物。 紙上層析的原理：常以水和有機溶劑作為展層劑；水和有機溶劑互溶后形成兩個相：一個是飽和了有機溶劑后的水相，一個是飽和了水后的有機溶劑相。一般來說，在相同的條件下，每種物質(zhì)都有其固定的 Rf 值。 混合氨基酸溶液 6mg/ml。 層析缸（ 2）。 【 實驗步驟 】 1．紙的處理 取 18 cm長、 18 cm寬的濾紙一張，離底邊 2 cm處用鉛筆輕輕劃一條與底邊平行的線，并等距離的在線上定點樣點 (原點 )劃圈，使圈的直徑小于 cm。 將培養(yǎng)皿中放入 2／ 3量的展層劑，放入層析缸中，然后將濾紙直立于層析缸的培養(yǎng)皿中，樣品端向下垂直放置，切勿使展層劑浸到樣品點，開始層析。 圖 1．原點； 2．層析點； 3．溶劑前沿 5 ．計算 用尺量