【正文】 ，用濾紙吸去表面水分。 3．標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液。當(dāng)抗壞血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使墑定液呈談紅色，即為終點(diǎn)。 【 實(shí)驗(yàn)原理 】 維生素 C是人類營(yíng)養(yǎng)中最重要的維生素之一，缺乏 時(shí)會(huì)產(chǎn)生壞血病，因此又稱為抗壞血酸。 【 注意事項(xiàng) 】 沸水浴中的試管在加入碘液之前一定要在自來水下冷卻。再向每支試管各加入 %淀粉溶液 3毫升和稀釋的唾液 l毫升。搖勻， 20分鐘后取出 3支試管，各加碘溶液 2滴，混勻，比較各管溶液的顏色。作為唾液淀粉酶的樣品液。直鏈淀粉（即可溶性淀粉）遇碘呈藍(lán)色；糊精按分子從大到小的順序，遇碘可呈藍(lán)色、紫色、暗褐色和紅色，最小的糊精和麥芽糖遇碘不顯顏色。通過本次的實(shí)驗(yàn)觀察，同學(xué)們應(yīng)該更加深刻的理解理論課上所講的酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的內(nèi)容。 顯色時(shí)要避免高溫，采用混合酸液反應(yīng)時(shí)溫度不會(huì)升得太高，一般在 4~32℃ 時(shí)，顏色能穩(wěn)定 2h。 100ml樣品中膽固醇含量在400mg之內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。如血沉淀放置后不變?yōu)樽丶t色或重濾后仍混濁，可在鎢酸與血混合液中加入 10％硫酸 1～ 2滴，待變?yōu)榘底厣? 再濾。 A0247。第三只血糖管中加 2ml蒸餾水。 10％（ m/V）鎢酸鈉溶液 動(dòng)物血（家兔心臟取血） 分光光度計(jì) 血糖管 奧氏吸管 水浴鍋 1表面皿 【 實(shí)驗(yàn)步驟 】 先在燒杯中加 （草酸鉀或草酸鈉），從家兔心臟取血 10ml放入燒杯，振蕩搖勻。該混合液在 4℃ 冰箱里可保存數(shù)日，如果暴露于陽(yáng)光下，數(shù)小時(shí)即失效。 堿性硫酸銅溶液（ A、 B液） （ 1） A液：稱取無水碳酸鈉 ，酒石酸鈉 酸氫鈉 ，用蒸餾水溶解，然后用 1000ml容量瓶定容至刻度。 血液中的葡萄糖與堿性硫酸銅溶液共熱，銅離子即被血液中的葡萄糖還原成氧化亞銅，后者又可使鉬酸試劑還原成低價(jià)的鉬藍(lán)（藍(lán)色）。 鑒定：用二苯胺法測(cè)定 DNA 實(shí)驗(yàn)五 血液中葡萄糖的測(cè)定 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 （ 1）理解血糖在生物體內(nèi)的重要意義。 （ 4）將 DNA粗品置于 檸檬酸三鈉溶液中，再加入 ，攪勻，加入一倍體積氯仿 異戊醇混合液，振搖 10min，離心 (4000r /min， 10min)，傾出上層液 (沉淀?xiàng)壢?)，加入 95%乙醇， DNA即沉淀析出。加畢，置 60℃ 水浴保溫 10min(不停攪拌 )溶液變得粘稠并略透明，取出冷至室溫。 11 ． 實(shí)驗(yàn)材料與儀器 大白鼠肝臟、勻漿器、離心機(jī) 5000r/min、量筒 50ml( 1)、 25ml( 1)、 10ml( 1)、吸管 5ml( 2)、水浴鍋、真空干燥器。 7 ． 3mol/L乙酸鈉 ／Ｌ EDTANa溶液：稱取 乙 酸鈉 408g、 ,稀釋至 1,000ml。 3． 25％ SDS溶液：溶 25g十二烷基硫酸鈉于 100ml 45％乙醇。向溶液 中加入適量乙醇， DNA即析出。 【 實(shí)驗(yàn)原理 】 在濃氯化鈉 (12mol/L)溶液中，脫氧核糖蛋白的溶解度很大，核糖蛋白的溶解很小。但操作時(shí)應(yīng)盡量減少緩沖液的污染、水分蒸發(fā)、 pH及離子強(qiáng)度的改變，并應(yīng)防止霉菌的滋長(zhǎng)。 7．選擇合適的緩沖液離子強(qiáng)度。點(diǎn)樣量不宜過多，點(diǎn)樣位置要合適。 【 實(shí)驗(yàn)步驟 】 1．薄膜準(zhǔn)備 2．點(diǎn)樣 3．電泳 4．染色和漂洗 5．薄膜和透明 6．定量 （ 1）洗脫法 注意！白蛋白因加入 NaOH的量比其他管多，其光密度值應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)，得到數(shù)值再代入上式中計(jì)算。這樣，血清蛋白質(zhì)在醋酸纖維素薄膜上就可以形成區(qū)帶，用以分離和分析蛋白質(zhì)。 （ 2）要求在半天內(nèi)測(cè)定 60個(gè)樣品。 測(cè)定中，蛋白質(zhì) 染料復(fù)合物會(huì)吸附在比色皿上，實(shí)驗(yàn) 證明可以忽視。以A595為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)年濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 【 實(shí)驗(yàn)試劑與器材 】 標(biāo)準(zhǔn)蛋白液（ ） %NaCl 稀釋到 2022ml。染料與蛋白質(zhì)結(jié)合后有紅色 棕黑色和藍(lán)色形式，最大光吸收由 465nm變成 595nm，測(cè)定 595 nm吸光的增加量，可以測(cè)定與其結(jié)合的蛋白質(zhì)的量。 (5)根據(jù)目的、要求，選擇合適溶劑系統(tǒng)。 【 注意事項(xiàng) 】 (1)在整個(gè)操作過程中，手只能接觸濾紙 邊緣 ，否則手指上的氨基酸會(huì)造成濾紙上眾多斑點(diǎn)。 當(dāng)溶劑前沿到達(dá)離上端 2 cm處，取出濾紙，用鉛筆描出溶劑前沿，晾干。 2．點(diǎn)樣 在每個(gè)圈下用鉛筆記上每種氨基酸的代號(hào)（混合樣可寫 M），然后用毛細(xì)管吸取樣品，輕輕地點(diǎn)到相應(yīng)的氨基酸圈內(nèi)，待晾干或用冷風(fēng)吹干后再點(diǎn) 1次。 微量注射器 10μl （ 1）或毛細(xì)管。 濾紙。 Rf值的定義為： Rf =(原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的距離 )/（原點(diǎn)到溶劑前沿的距離） 用紙層析鑒定樣品時(shí)，一般都與標(biāo)準(zhǔn)品相比較。由于濾紙纖維素上的羥基和水分子有較大的親和力，而與有機(jī)溶劑的親和力相對(duì)較弱，因此我們認(rèn)為水相為固定相，有機(jī)溶劑相為移動(dòng)相。紙上層析法是分離、鑒定和定量測(cè)定氨基酸、糖類、抗生素等有機(jī)物質(zhì)的一項(xiàng)重要而簡(jiǎn)便的分析方法。 目 錄 ? 實(shí)驗(yàn)一 氨基酸的分離鑒定 —— 紙層析法 (操作性 ) 4學(xué)時(shí) ? 實(shí)驗(yàn)二 考馬斯亮藍(lán)結(jié)合法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度 (操作性 ) 3學(xué)時(shí) ? 實(shí)驗(yàn)三 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳 (驗(yàn)證性 ) 5學(xué)時(shí) ? 實(shí)驗(yàn)四 動(dòng)物肝肝臟 DNA的分離與鑒定 (操作性 ) 3學(xué)時(shí) ? 實(shí)驗(yàn)五 血液中葡萄糖的測(cè)定 (操作性 ) 3學(xué)時(shí) ? 實(shí)驗(yàn)六 血清中總膽固醇的測(cè)定 (操作性 ) 4學(xué)時(shí) ? 實(shí)驗(yàn)七 唾液淀粉酶活性的觀察 (綜合性 ) 4學(xué)時(shí) ? 實(shí)驗(yàn)八 維生素 C的定量測(cè)定 (操作性 ) 4學(xué)時(shí) ? 實(shí)驗(yàn)九 脂肪酸的 β氧化 (操作性 ) 4學(xué)時(shí) ? 實(shí)驗(yàn)十 瓊脂糖膠電泳法分離乳酸脫氫同工酶 (操作性 ) 4學(xué)時(shí) ? 實(shí)驗(yàn)十一 酪蛋白的制備 (操作性 ) 4學(xué)時(shí) ? 實(shí)驗(yàn)十二 肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力測(cè)定 (綜合性 ) 3學(xué)時(shí) 實(shí)驗(yàn)一 氨基酸的分離鑒定 —— 紙層析法 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 。通過實(shí)驗(yàn)有助于學(xué)生加深對(duì)生物化學(xué)的基本知識(shí)和基本理論的理解，掌握生物化學(xué)的主要方法與技術(shù)，包括經(jīng)典的、常規(guī)的、以及現(xiàn)代的方法與技術(shù)。 【 實(shí)驗(yàn)原理 】 紙上層析法是分配層析法中的一種，常以濾紙為惰性支持物。 紙上層析的原理：常以水和有機(jī)溶劑作為展層劑；水和有機(jī)溶劑互溶后形成兩個(gè)相：一個(gè)是飽和了有機(jī)溶劑后的水相，一個(gè)是飽和了水后的有機(jī)溶劑相。一般來說，在相同的條件下，每種物質(zhì)都有其固定的 Rf 值。 混合氨基酸溶液 6mg/ml。 層析缸（ 2）。 【 實(shí)驗(yàn)步驟 】 1．紙的處理 取 18 cm長(zhǎng)、 18 cm寬的濾紙一張，離底邊 2 cm處用鉛筆輕輕劃一條與底邊平行的線，并等距離的在線上定點(diǎn)樣點(diǎn) (原點(diǎn) )劃圈，使圈的直徑小于 cm。 將培養(yǎng)皿中放入 2／ 3量的展層劑，放入層析缸中，然后將濾紙直立于層析缸的培養(yǎng)皿中，樣品端向下垂直放置，切勿使展層劑浸到樣品點(diǎn)，開始層析。 圖 1．原點(diǎn)； 2．層析點(diǎn)； 3．溶劑前沿 5 ．計(jì)算 用尺量