【正文】 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 學(xué)習(xí)從牛奶中制備酪蛋白的原理和方法。凝膠凝固后，于此凝膠板一端 1/3處，用小刀開一狹長小槽，用濾紙片仔細(xì)吸去小槽內(nèi)液體。 【 注意事項 】 用新鮮肝糜進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，確保肝內(nèi)酶活力。 NaIO+NaI+2HCl→I 2+2NaCI+H2O I2+2Na2S2O3→Na 2S4O6+2NaI 根據(jù)滴定樣品與滴定對照所消耗的硫代硫酸鈉之差，可以計算由丁酸氧化生成丙酮的量。兩分子乙酰輔酶 A可再縮合成乙酰乙酸。 (2)樣液滴定： 準(zhǔn)確吸取濾液兩份，每份 10． 0 m1分別放人二個 l00 m1錐形瓶內(nèi)，滴定方法同前。最后用 1％ ECt溶液稀釋到刻度并混勻，靜置 10分鐘，過濾，濾液備用。 3．標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液。 【 實(shí)驗(yàn)原理 】 維生素 C是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，缺乏 時會產(chǎn)生壞血病，因此又稱為抗壞血酸。再向每支試管各加入 %淀粉溶液 3毫升和稀釋的唾液 l毫升。作為唾液淀粉酶的樣品液。通過本次的實(shí)驗(yàn)觀察，同學(xué)們應(yīng)該更加深刻的理解理論課上所講的酶促反應(yīng)動力學(xué)的內(nèi)容。 100ml樣品中膽固醇含量在400mg之內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。 A0247。 10％（ m/V）鎢酸鈉溶液 動物血（家兔心臟取血） 分光光度計 血糖管 奧氏吸管 水浴鍋 1表面皿 【 實(shí)驗(yàn)步驟 】 先在燒杯中加 （草酸鉀或草酸鈉），從家兔心臟取血 10ml放入燒杯，振蕩搖勻。 堿性硫酸銅溶液（ A、 B液） （ 1） A液：稱取無水碳酸鈉 ，酒石酸鈉 酸氫鈉 ，用蒸餾水溶解，然后用 1000ml容量瓶定容至刻度。 鑒定：用二苯胺法測定 DNA 實(shí)驗(yàn)五 血液中葡萄糖的測定 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 （ 1）理解血糖在生物體內(nèi)的重要意義。加畢，置 60℃ 水浴保溫 10min(不停攪拌 )溶液變得粘稠并略透明，取出冷至室溫。 7 ． 3mol/L乙酸鈉 ／Ｌ EDTANa溶液：稱取 乙 酸鈉 408g、 ,稀釋至 1,000ml。向溶液 中加入適量乙醇， DNA即析出。但操作時應(yīng)盡量減少緩沖液的污染、水分蒸發(fā)、 pH及離子強(qiáng)度的改變，并應(yīng)防止霉菌的滋長。點(diǎn)樣量不宜過多，點(diǎn)樣位置要合適。這樣，血清蛋白質(zhì)在醋酸纖維素薄膜上就可以形成區(qū)帶，用以分離和分析蛋白質(zhì)。 測定中，蛋白質(zhì) 染料復(fù)合物會吸附在比色皿上，實(shí)驗(yàn) 證明可以忽視。 【 實(shí)驗(yàn)試劑與器材 】 標(biāo)準(zhǔn)蛋白液（ ） %NaCl 稀釋到 2022ml。 (5)根據(jù)目的、要求，選擇合適溶劑系統(tǒng)。 當(dāng)溶劑前沿到達(dá)離上端 2 cm處，取出濾紙，用鉛筆描出溶劑前沿，晾干。 微量注射器 10μl （ 1）或毛細(xì)管。 Rf值的定義為： Rf =(原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的距離 )/（原點(diǎn)到溶劑前沿的距離） 用紙層析鑒定樣品時，一般都與標(biāo)準(zhǔn)品相比較。紙上層析法是分離、鑒定和定量測定氨基酸、糖類、抗生素等有機(jī)物質(zhì)的一項重要而簡便的分析方法。通過實(shí)驗(yàn)有助于學(xué)生加深對生物化學(xué)的基本知識和基本理論的理解，掌握生物化學(xué)的主要方法與技術(shù)，包括經(jīng)典的、常規(guī)的、以及現(xiàn)代的方法與技術(shù)。 紙上層析的原理：常以水和有機(jī)溶劑作為展層劑；水和有機(jī)溶劑互溶后形成兩個相：一個是飽和了有機(jī)溶劑后的水相，一個是飽和了水后的有機(jī)溶劑相。 混合氨基酸溶液 6mg/ml。 【 實(shí)驗(yàn)步驟 】 1．紙的處理 取 18 cm長、 18 cm寬的濾紙一張，離底邊 2 cm處用鉛筆輕輕劃一條與底邊平行的線，并等距離的在線上定點(diǎn)樣點(diǎn) (原點(diǎn) )劃圈，使圈的直徑小于 cm。 圖 1．原點(diǎn)； 2．層析點(diǎn)； 3．溶劑前沿 5 ．計算 用尺量出原點(diǎn)到斑點(diǎn)中心距離以及原點(diǎn)到溶劑前沿距離，計算各標(biāo)準(zhǔn)氨基酸和混合氨基酸的 Rf值。 考馬斯亮藍(lán) G250存在著兩種不同樣色形式，紅色 棕黑色和藍(lán)色。 漩渦混合器 移液管 （ 2）， （ 2）， 5ml（ 1） 分光光度計 試管 15cm ( 8) 量筒 100ml( 1) 電子分析天平 1試管架 ( 1) 【 實(shí)驗(yàn)步驟 】 一、標(biāo)準(zhǔn)曲線線的繪制 取 7支干凈試管，按下表進(jìn)行編號并加入試劑。 （ 1）樣品不容易溶解，但要求結(jié)果很準(zhǔn)確。 漂洗液： ％醋酸 洗脫液： mol/L NaOH溶液 透明液：無水乙醇 7份，冰醋酸 3份混合即成。 6．較低溫度下電泳一般能獲得較好的圖譜，故室溫不宜過高。 2. 點(diǎn)樣時，置于電場的正極還是負(fù)極，為什么？ 實(shí)驗(yàn)四 動物肝肝臟 DNA的分離與鑒定 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 學(xué)習(xí)常用的 DNA分離方法 。 2． ／Ｌ ／Ｌ EDTANa溶液： 溶 － Na于蒸餾水，稀釋至 1000ml。 10 ． 1mol／Ｌ過氯酸溶液，將 10ml過氯酸 (70%)用蒸餾 水稀釋至 11ml。去掉沉淀，上層清夜徐徐加入 1． 5— 2倍 95%乙醇， DNA沉淀即析出，用玻棒慢慢攪動，則 DNA絲狀物即纏在玻棒上。測定血液中葡萄糖的含量，即測復(fù)雜組分中一種物質(zhì)的量，根據(jù)生化實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)的原理，可采用分光光度法（比色法）進(jìn)行測定。 取 A液 25ml， B液 5ml，混合后，再用 A液定容至50ml，搖勻。 取具 25ml刻度的血糖管 3只，編號，用奧氏吸管吸取無蛋白血濾液 2ml，放入第一只血糖管中，于第二只 血糖管中加 2ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液。 ，是因鎢酸鈉與硫酸作用生成鎢酸，在適當(dāng)酸度時，使血紅蛋白變性、沉淀。 管號 試劑 0 1 2 3 4 標(biāo)準(zhǔn)膽固醇應(yīng)用液 /ml 0 醋酸 /ml 0 鄰苯二甲醛試劑 /ml 蒸餾水 /ml 混合酸 /ml 100ml樣品中總膽固醇含量 /mg 0 100 200 300 400 A550nm 樣品的測定 取 2支清潔干燥試管，編號后，按表加入試劑。它們遇碘呈不同的顏色。將第 l、2號試管放入 37℃ 恒溫水浴中保溫，第 3號試管放入冰水 中冷卻， 5分鐘后，向第 l號試管中加人煮沸 5一 15分鐘的稀釋唾液 l毫升；向第 3號試管加稀釋唾液各 l毫升。觀察比較 3支試管顏色的深淺。 因此，可用 2， 6— 二氯酚滴定樣品中還原型抗壞血酸。 6. 松針、新鮮蔬菜 (辣椒、青菜、西紅柿等 )、新鮮水果(桔子、柑子、橙、柚等 )。稱取漿狀物 5． 0g，倒入 50 m1容量瓶中以 2％草酸溶液稀釋至刻廢。 W＝ 10 ml樣液相當(dāng)于含樣品之 g數(shù)。酮體為機(jī)體代謝的中間產(chǎn)物。再加 %NaCl溶液至總體積 10ml，得肝組織糜。 【 實(shí)驗(yàn)原理 】 能催化同一反應(yīng)而蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)不同的酶，稱為同工酶。 顯色 約于電泳終止前 10min，將 %~%瓊脂糖染色膠在水浴中溶化。 酪蛋白是一些含磷蛋白質(zhì)的混合物 ， 等電點(diǎn)為。 （二）酪蛋白的純化 3次，離心 10分鐘（ 3 000r/min），棄去上清液。 100%?測得含量得率:理論含量實(shí)驗(yàn)十二 肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力測定 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 掌握谷丙轉(zhuǎn)氨酶的測